换一批
换一批类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅵ型分泌系统的Hcp1蛋白转位介导多核巨细胞形成
Translocation of Hcp1 protein in type Ⅵ secretion system of Burkholderia pseudomallei mediates formation of multinucleated giant cells
摘要：
目的 探讨类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅵ型分泌系统溶血素共调节蛋白1(hemolysin coregulatory protein 1,Hcp1)在感染宿主细胞引起多核巨细胞(multinucleated giant cells,MNGC)形成的作用及机制.方法 分别采用同源重组和质粒回补技术构建类鼻疽菌hcp1基因缺失株(BPC006Δhcp1)和缺失回补株(BPC006 Δhcp1::hcp1);分别用类鼻疽菌 BPC006 野生株、BPC006 Δhcp1 和 BPC006 Δhcp1::hcp1 感染RAW264.7细胞,通过激光共聚焦分析Hcp1蛋白的定位情况;在293T细胞中转染Hcp1真核表达载体后进行细胞质膜分离进一步验证定位情况;在细胞感染模型上,通过吉姆萨染色检测抗Hcp1多克隆抗体封闭对MNGC形成的影响,探究Hcp1在类鼻疽菌感染导致的MNGC形成中的作用和生物学意义.结果 Western blot检测结果显示 BPC006 Δhcp1不表达Hcp1蛋白,而BPC006 Δhcp1::hcp1能恢复Hcp1蛋白的表达,成功构建类鼻疽菌BPC006 Δhcp1和BPC006 Δhcp1::hcp1.细胞免疫荧光共定位实验和质膜分离实验都表明Hcp1可以定位在宿主细胞膜上,且相较于对照组抗Hcp1多克隆抗体能抑制类鼻疽菌感染所诱导的MNGC形成(P＜0.01).结论 类鼻疽菌感染RAW264.7细胞时Hcp1可转位至细胞膜,并在MNGC形成中发挥重要作用.
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作者：
作者单位：
400038 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床微生物与免疫学教研室
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400038 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床微生物与免疫学教研室;400038 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)创伤与化学中毒全国重点实验室
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期刊：
《陆军军医大学学报》2024年46卷15期 1721-1728页
ISTICPKUCSCD
关键词：
类鼻疽伯克霍尔德菌Hcp1多核巨细胞基因缺失与回补Burkholderia pseudomalleiHcp1multinuclear giant cellsgene knockout and complementation
栏目名称：
基础医学
DOI：
10.16016/j.2097-0927.202311040
发布时间：
2024-09-06
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