腺苷A3受体激动剂对人肠上皮细胞焦亡的影响
Effects of A3AR agonist on human intestinal epithelial cell pyroptosis
目的 探讨腺苷A3 受体(A3AR)激动剂 2-Cl-IB-MECA对人肠上皮细胞焦亡的影响及其分子机制.方法 根据不同处理方式将人肠上皮细胞HT-29分为 4 组:对照组(不作处理)、脂多糖(LPS)组(加入终浓度为 10 μg/mL的LPS)、30 nmol/L MECA组(在LPS组基础上,加入终浓度为 30 nmol/L的 2-Cl-IB-MECA)、100 nmol/L MECA组(在LPS组基础上,加入终浓度为 100 nmol/L的2-Cl-IB-MECA).采用乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法和碘化丙啶(PI)荧光染色法检测各组细胞焦亡水平.采用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β蛋白表达水平.采用蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、gasdermin D(GSDMD)和IL-1β表达水平.结果 与对照组相比,LPS组的PI阳性细胞数目增加,LDH活性增强,p-NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、GSDMD和IL-1β表达水平均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).与LPS组相比,100 nmol/L MECA组的PI阳性细胞数目减少,LDH活性减弱,p-NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、GSDMD和IL-1β表达水平均降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 A3AR激活可减少肠上皮细胞焦亡,该作用可能与其抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关.
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