换一批
换一批烟草香气相关基因CRISPR/Cas9 编辑突变体库的构建
Construction of a mutant library associated with aroma genes in tobacco using CRISPR/Cas9
摘要：
为探究CRISPR/Cas9 基因编辑技术构建烟草突变体库的可行性,该研究以烤烟品种'红花大金元'为实验材料筛选了 100 个可能参与烟草香气代谢的基因,设计相应的 100 个 sgRNA 并构建了由 100 个CRISPR/Cas9 编辑载体组成的质粒库,获得转基因材料后分析了载体的共转化率、靶向编辑率和脱靶编辑情况.结果表明:(1)通过农杆菌介导 100 个sgRNA的共转化后,在 172 个阳性转化株中检测到了其中的77 个sgRNA,共转化率为 77%.(2)在 77 个携带sgRNA的转基因后代中,69 个sgRNA对目标基因进行了靶向编辑,编辑率为 89.6%.(3)脱靶位点测序检测发现,只有 1 个sgRNA在非目标靶位点产生了脱靶编辑,表明CRISPR/Cas9 基因编辑技术在烟草中的脱靶概率非常低.综上所述,利用CRISPR/Cas9 载体库共转化对烟草基因进行高通量靶向编辑以构建突变体库的方法切实可行,并且该方法有共转化率高、编辑率高和脱靶编辑概率低等特点.
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作者：
作者单位：
云南中烟工业有限责任公司技术中心,云南省烟草化学重点实验室,昆明 650231
[1]
中国科学院西双版纳热带植物园,热带植物资源可持续利用重点实验室,昆明 650223
[2]
云南农业大学,昆明 650201
[3]
期刊：
《广西植物》2024年44卷7期 1278-1288页
ISTICPKUCSCD
分类号：
Q943
栏目名称：
遗传与育种
DOI：
10.11931/guihaia.gxzw202306050
发布时间：
2024-08-20
基金项目：
云南省烟草化学重点实验室开放课题
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