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目的 探讨肺癌细胞来源的外泌体对中性粒细胞的活化作用,以及活化后的中性粒细胞对肺癌细胞生物学行为的影响.方法 为研究肺癌细胞源性外泌体对中性粒细胞功能的影响,将实验分为2 组.NCM460-Exo组:向中性粒细胞的培养基中加入200 μL(400 μg/μL)的NCM460-Exo,共培养24 h;SW480-Exo组:向中性粒细胞的培养基中加入200 μL(400 μg/μL)的SW480-Exo,共培养24 h.为研究TGF-β1/Smad信号通路在其中的作用,增设SW480-Exo+SB-431542 组:在加入SW480-Exo前 1h,向培养基中添加TGFβR1 抑制剂SB-431542 对中性粒细胞进行处理,然后加入SW480-Exo共培养 24 h.为研究肺癌细胞源性外泌体处理的中性粒细胞对肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响,将实验分为 2 组.NCM460-Exo-Neu组:NCM460-Exo 活化的中性粒细胞与 SW480 细胞进行共培养;SW480-Exo-Neu 组:SW480-Exo活化的中性粒细胞与 SW480 细胞进行共培养.采用流式细胞术与荧光定量 PCR 检测SW480-Exo对中性粒细胞凋亡以及IL-8、TNF-α、OSM、MMP9、VEGF mRNA表达的影响.应用Transwell与Western blot检测SW480-Exo活化的中性粒细胞对SW480 细胞迁移、侵袭、上皮间质转化相关蛋白表达的影响.转录组测序筛选NCM460-Exo、SW480-Exo活化的中性粒细胞间的差异表达基因,并行KEGG通路富集分析.应用Western blot与荧光定量PCR检测TGFβR1 抑制剂SB-431542 对SW480-Exo活化中性粒细胞的影响.结果 与NCM460-Exo处理的中性粒细胞比较,SW480-Exo处理的中性粒细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),IL-8、TNF-α、OSM、MMP9、VEGF mRNA表达水平显著升高(P＜0.05).与对照组比较,SW480-Exo活化的中性粒细胞处理的SW480 细胞迁移和侵袭能力显著升高(P＜0.05),间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin表达水平显著升高,上皮细胞标志物E-cadherin表达水平显著降低(P＜0.05).转录组测序筛选到TGF-β信号通路在SW480-Exo活化的中性粒细胞中显著增强.对于SW480-Exo活化的中性粒细胞,SB-431542 显著抑制了p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3 表达水平(P＜0.05),以及IL-8、TNF-α、OSM、MMP9、VEGF mRNA表达水平(P＜0.05).结论 肺癌细胞来源的外泌体诱导中性粒细胞活化,进而增强肺癌细胞的迁移与侵袭能力.