换一批
换一批利用末龄幼虫蜕和蛹壳对苹果蠹蛾基因的无创伤检测方法
A non-destructive method for the detection of codling moth genotypes using the exuviate of the final instar larvae or puparia
摘要：
苹果蠹蛾Cydia pomonella(L.)是我国重大农业入侵害虫,对我国果业健康发展造成严重威胁.在利用基因编辑等技术对相关基因进行功能研究时,通常采用单对交配策略对纯合突变体进行筛选.因此,在配对前明确个体基因型,避免对虫体造成损伤尤为重要.本研究分别收集末龄幼虫蜕(10个蜕)和蛹壳(1个、5个、10个、15个蛹壳),通过基因组DNA提取、目的基因PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测和PCR产物测序,以评估该方法作为苹果蠹蛾基因检测的可行性.结果显示,以苹果蠹蛾末龄幼虫10个蜕及5个以上蛹壳提取的基因组DNA作为模板,扩增精巢特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Testis specific serine/threonine protein kinase,TSSK1)基因,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测得到单一、明亮的条带,经测序证实该产物是目的基因序列.基于高效及节约成本的原则,拟推荐利用10个末龄幼虫蜕或10个蛹壳提取基因组DNA、通过PCR扩增和测序进行苹果蠹蛾的无损伤基因型检测.本研究建立了一种利用幼虫蜕和蛹壳进行苹果蠹蛾无损伤、高效的基因检测方法,为提高苹果蠹蛾基因功能研究的效率奠定了基础.
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作者：
期刊：
《环境昆虫学报》2024年46卷4期 1018-1024页
ISTICPKUCSCD
关键词：
苹果蠹蛾基因型无创伤检测CRISPR/Cas9突变品系Codling mothgenotypesnon-destructive detectionCRISPR/Cas9mutant strain
栏目名称：
技术与方法
DOI：
10.3969/j.issn.1674-0858.2024.04.25
发布时间：
2024-08-16
基金项目：
国家重点研发计划
兴辽英才计划项目
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