二酰甘油通过诱导中性粒细胞胞外捕获网抑制牙龈上皮角化屏障
Diacylglycerol suppresses gingival epithelial keratinization and barrier by inducing neutrophil extracellular traps formation
目的:探讨二酰甘油(DG)诱导中性粒细胞胞外捕获网(NETs)生成和潜在的调控机制,评估NETs对牙龈上皮角化屏障的影响.方法:从MTBLS4684 数据库中获取牙周炎和健康受试者的脂质组学数据,对其进行标准化处理,分析两组中DG的含量差异.使用DG处理人外周血多形核中性粒细胞(PMNs)后,通过Western blot检测瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)表达,Sytox green染色检测胞外核酸变化,免疫荧光检测CitH3 表达及分布的变化.使用蛋白激酶C(PKC)抑制剂预处理PMNs后,再加入DG 刺激,通过 Western blot、Sytox green 染色和免疫荧光检测 NETs 形成.提取 NETs 刺激人牙龈角质形成细胞(HGKs),采用实时荧光定量PCR和Western blot检测兜甲蛋白(LOR)和紧密连接蛋白 2(CLDN2)的表达变化.通过免疫组化检测健康和牙周炎组牙龈上皮中LOR和CLDN2 的表达,并使用Western blot检测牙龈上皮中NETs标志物CitH3 和髓过氧化物酶(MPO)蛋白表达.结果:牙周炎患者牙龈上皮中多种 DG 含量增高.DG 刺激 PMNs 后,CitH3 蛋白表达增加(P<0.01),核酸释放到细胞外,CitH3 荧光表达增强并向细胞外分布;使用PKC抑制剂后,上述过程被有效抑制.NETs刺激HGKs细胞后,角化标志物LOR和屏障标志物CLDN2 基因和蛋白表达降低(P<0.05).牙周炎患者牙龈上皮中LOR和CLDN2表达降低,CitH3 和MPO蛋白表达增加(P<0.05).结论:DG通过激活PMNs中的PKC促进NETs形成和累积,进而破坏牙龈上皮的角化和屏障功能.
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