换一批
换一批口蹄疫病毒样颗粒诱导表达型载体的构建及其BHK-21细胞池的筛获
Construction of foot-and-mouth disease virus like particles-induced expression vectors and screening of BHK-21 cell pools
摘要：
瞬时表达是目前利用哺乳动物细胞表达口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白的主流方法.为实现染色体稳定表达 FMDV 衣壳蛋白并高效组装出病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究构建了piggyBac(PB)转座-组成型表达、PB转座-四环素(tetracycline,Tet)诱导型表达两套质粒.利用荧光蛋白标记技术,验证了质粒的功能.通过抗生素筛选得到了组成型表达P12A3C(WT/L127P)基因的BHK-21 细胞池(C-WT、C-L127P)和诱导型表达P12A3C(WT/L127P)基因的BHK-21 细胞池(I-WT、I-L127P).荧光观察和PCR检测证明了绿色荧光蛋白、3C蛋白酶、反向四环素转录激活因子等基因的稳定整合.Western blotting、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)实验证明了细胞池I-L127P具有更强的衣壳蛋白和VLPs生产能力.本研究首次实现了哺乳动物细胞染色体诱导表达 FMDV 衣壳蛋白,有助于推动哺乳动物生产 FMDV VLPs疫苗的技术工艺,也为构建其他蛋白的哺乳动物细胞诱导型表达系统提供了参考.
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作者：
作者单位：
中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学 动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃 兰州 730000
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中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学 动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃 兰州 730000;甘肃农业大学动物医学院,甘肃 兰州 730070;云南省畜牧兽医科学院 云南热带亚热带动物病毒重点病实验室,云南 昆明 650224
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期刊：
《生物工程学报》2023年39卷12期 4849-4860页
MEDLINEISTICPKUCSCD
关键词：
口蹄疫病毒病毒样颗粒质粒构建细胞池诱导表达foot-and-mouth disease virus(FMDV)virus like particles(VLPs)plasmid constructioncell poolinducible expression
栏目名称：
动物及兽医生物技术
DOI：
10.13345/j.cjb.230114
发布时间：
2024-03-19
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