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目的 建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法.方法 以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-KB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法.依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证,包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性.结果 成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点(500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL),效靶比为4∶1,诱导时间为4 h.本方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经测定,相对效价分别为59.63％±4.57％,75.54％±4.05％,99.98％±9.63％,123.90％±5.54％和 142.51％±12.82％;对应的回收率分别为 93.17％±7.15％,94.42％±5.06％,99.98％±9.63％,99.12％±4.43％以及 91.21％±8.21％,CV 分别为 7.67％,5.35％,9.63％,4.47％和 9.00％,上述结果的变异系数CV值均＜10％;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R2=0.982 3,线性良好;本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响,对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义.结论 利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性.