换一批
换一批基因Ⅳ型禽呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及功能鉴定
Preparation and Functional Characterization of Monoclonal Antibodies against σC Protein of Genotype Ⅳ Avian Reovirus
摘要：
为制备基因Ⅳ型(GC Ⅳ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GC Ⅳ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞;以间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验鉴定杂交瘤细胞后,将杂交瘤细胞株通过腹腔注射小鼠制备单克隆抗体腹水,以ELISA测定腹水效价.结果显示:成功筛选出一株分泌ARV GC Ⅳ σC蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株(1H4);制备的单克隆抗体能与ARV GC Ⅳ σC蛋白发生反应,同时与感染不同基因型ARV的鸡肝癌细胞(LMH)均有良好的反应性;该单克隆抗体识别重链为IgG1,其腹水ELISA效价为 1:256 000.结果表明,成功制备ARV GC Ⅳ σC蛋白单克隆抗体,其效价高,反应性良好,为进一步研究σC蛋白功能、ARV致病机理以及建立临床诊断方法奠定了基础.
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作者：
期刊：
《中国动物检疫》2024年41卷8期 98-104页
分类号：
S855.3
栏目名称：
技术支撑
DOI：
10.3969/j.issn.1005-944X.2024.08.018
发布时间：
2024-09-02
基金项目：
国家重点研发计划
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项
国家肉鸡产业技术体系项目
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