换一批
换一批腺相关病毒基因治疗产品基因组滴度数字PCR检测方法的建立及验证
Establishment and verification of a digital PCR detection method for genome titer of adeno-associated virus gene therapy products
摘要：
目的 建立一种广泛用于腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)基因治疗产品基因组滴度检测的数字PCR(digital polymerase chain reaction,dPCR)法,并进行初步验证.方法 通过对同一批次AAV基因治疗产品进行dPCR检测,优化筛选最佳引物、探针、样品处理方式以及引物、探针浓度;对优化后方法进行专属性、线性、相对准确度、重复性验证,并确定方法的定量限及检测范围.结果 选择NFS-05 vector titer 5.0为引物、探针,引物终浓度为800 nmol/L,探针终浓度为400 nmol/L,样品前处理方式为经Proteinase K消化.建立的方法专属性良好;在3.3× 105～1.3 × 108vg/mL检测范围内,标准曲线相关系数(R2)＞0.999;相对准确度为70％～130％;重复性CV均≤15％;定量限为3.3× 105vg/mL.结论 建立的dPCR法专属性、线性、准确度及重复性良好,可用于NFS-05重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)原液产品基因组滴度的检测.
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作者：
作者单位：
中国食品药品检定研究院 国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 100050
[1]
武汉纽福斯生物科技有限公司,湖北武汉 430014
[2]
期刊：
《中国生物制品学杂志》2024年37卷8期 897-903,910页
ISTICPKUCSCDBP
关键词：
数字PCR腺相关病毒基因组滴度基因治疗Digital polymerase chain reaction(dPCR)Adeno-associated virus(AAV)Genome titerGene therapy
分类号：
R917
栏目名称：
基因治疗制剂专栏
发布时间：
2024-08-30
基金项目：
北京市科技计划课题
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