换一批
换一批严重急性呼吸综合征冠状病毒2受体结合域蛋白的分泌表达及其免疫原性分析
Secretory expression and immunogenicity analysis of SARS-CoV-2 RBD protein
摘要：
目的 原核可溶性表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,纯化后免疫小鼠,检测其免疫原性,为SARS-CoV-2候选疫苗的制备提供新的思路.方法 扩增SARS-CoV-2 RBD蛋白基因片段,酶切后与pNCMO2表达载体连接,构建重组表达质粒pNC-RBD.将重组原核表达质粒转化入短小芽孢杆菌感受态细胞,扩大培养并降温诱导蛋白表达.利用亲和层析纯化目的蛋白,经氢氧化铝佐剂吸附后经背部皮下免疫雌性BALB/c小鼠,以仅免疫铝佐剂为对照,每组10只.ELISA法检测体液免疫效果,体外增殖试验测定细胞免疫效果,ELISA法测定多种细胞因子的体外分泌,流式细胞术测定细胞分型.结果 重组表达质粒pNC-RBD经菌落PCR及测序证明构建正确.重组蛋白相对分子质量约22 000,可分泌表达.纯化后重组蛋白纯度达95％以上.免疫小鼠后血清结合抗体和中和抗体效价分别可达1∶10000和1∶750左右,均显著高于佐剂组(t分别为2.845和2.528,P均＜0.01);体外可刺激淋巴细胞增殖,并促进IL-1β及IFNγ的分泌;细胞分型试验结果表明促进了CD4+和CD8+T细胞淋巴细胞增殖.结论 成功可溶性表达了SARS-CoV-2 RBD蛋白,其免疫原性良好,为以RBD蛋白为基础研制SARS-CoV-2基因工程疫苗奠定了基础.
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作者：
作者单位：
武威职业学院药学院,甘肃武威 733000
[1]
长春生物制品研究所有限责任公司疫苗研究室,吉林长春 130012
[2]
深圳鑫泰康生物科技有限公司,广东深圳 518000
[3]
国药中国生物技术股份有限公司,北京 130012
[4]
武威职业学院药学院,甘肃武威 733000;广东省科学院生物与医学工程研究所,广东广州 510316
[5]
期刊：
《中国生物制品学杂志》2024年37卷8期 911-916,931页
ISTICPKUCSCDBP
关键词：
严重急性呼吸综合征冠状病毒2受体结合域蛋白可溶性表达免疫原性Severe acute respiratory symptom coronavirus 2(SARS-CoV-2)Receptor binding domain(RBD)proteinSoluble protein expressionImmunogenicity
分类号：
R373.2+3
栏目名称：
疫苗研究
发布时间：
2024-08-30
基金项目：
中央引导地方科技发展资金
吉林省科技发展计划项目
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