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[目的]基于试验设计构建连蒲双清散抗炎抑菌的谱效关联分析,并结合网络药理及体内外试验揭示其药效物质基础及作用机制.[方法]选取黄连蒲公英比例、提取酸浓度、乙醇浓度为影响因素针对性设计L9(34)正交试验,得到9种连蒲双清散提取物,采用高效液相色谱(HPLC)法建立连蒲双清散不同提取物的指纹图谱;以脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症指标和对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径作为药效学评价指标,开展连蒲双清散的体外药效学研究;采用灰色关联度分析法及偏最小二乘回归分析法建立谱效关系,筛选出其发挥抗炎药效和对金黄色葡萄球菌有抑菌效果的药效物质.通过网络药理手段从另一个层面筛选药效成分和靶点,并通过体内试验对谱效分析和网络药理学的结果进行验证.[结果]HPLC指纹图谱识别出9个共有峰,并鉴定出4种组分(菊苣酸、黄连碱、表小檗碱和巴马汀).正交试验结果显示,黄连中的成分对金黄色葡萄球菌的抑菌效果起主导作用,而蒲公英对抗炎药效的发挥作用更明显.谱效分析筛选出表小檗碱和黄连碱是连蒲双清散的部分药效物质基础.网络药理学挖掘出表小檗碱、巴马汀、黄连碱、木犀草素和咖啡酸是网络中权重最高的5个成分,白细胞介素-6(IL6)和肿瘤坏死因子(TNF)是其中2个主要的作用靶点;分子对接结果显示,5个化合物与2个靶点蛋白结合能均低于-5 kJ/mol,对接良好.小鼠急性肠炎模型中,病理切片显示,经连蒲双清散治疗后的小鼠结肠中炎症细胞浸润病变面积明显减少;ELISA检测结果显示,药物组与模型组小鼠结肠中炎症因子表达量具有显著差异(P＜0.05).[结论]基于试验设计的谱效关联分析结合网络药理学有效挖掘出连蒲双清散发挥抗炎作用和对金黄色葡萄球菌有抑菌效果的主要药效物质是表小檗碱和黄连碱,主要作用靶点是IL6和TNF.本研究为探讨复方中药的药效物质基础及作用靶点提供了有意义的尝试.