基于凝血级联途径研究血栓通注射液对博来霉素诱导肺纤维化大鼠的作用机制
Mechanism of Xueshuantong Injection on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats based on coagulation cascade pathway
基于凝血级联途径探讨血栓通注射液(Xueshuantong Injection,XST)对博来霉素(bleomycin,BLM)所致肺纤维化大鼠的作用机制.将 60 只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮组(pirfenidone,PFD,50 mg·kg-1)组和 27、54、81 mg·kg-1 XST组,采用气管内注入博来霉素(5 mg·kg-1)建立肺纤维化大鼠模型.24 h后,给药组分别给予相应的药物,假手术组、模型组给予等体积的生理盐水.第 28 天取材,观察大鼠肺部影像学与胶原纤维变化,并采用免疫荧光法检测大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、波形蛋白(vimentin,Vim)与 E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达,Western blot法检测肺组织α-SMA、Col-Ⅰ、Vim和E-cad的蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠肺组织中凝血酶原片段(prothrombin fragment 1+2,F1+2)、凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)、可溶性纤维蛋白单体复合物(soluble fibrin monomer complex,SFMC)和大鼠血纤蛋白原降解产物(fibrinogen degradation product,FDP)含量,最后通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blot与免疫荧光法测定肺组织中蛋白酶激活受体-1(protease-activated receptors-1,PAR-1)mRNA水平与蛋白水平.与模型组相比,给予XST后肺部扫描也显示出斑片状、不均匀的阴影,但这些阴影的密度低于模型组;同时大鼠肺部Ⅰ型胶原纤维显著减少;并且XST抑制上皮-间充质转化并下调α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达.在凝血系统方面,给予 81 mg·kg-1 XST可显著降低SFMC与FDP的含量;同时 81 mg·kg-1 XST可显著下调PAR-1 mRNA水平与蛋白水平.XST具有抗大鼠肺纤维化的作用,其机制可能与下调PAR-1从而改善凝血途径的异常有关.
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