银杏内酯B通过调控miR-24-3p对人牙周膜干细胞增殖、成骨分化的影响
Effects of ginkgolide B on proliferation and osteogenic differentiation of human perimembrane stem cells by regulating miR-24-3p
目的:探究银杏内酯B (GB)调控miR-24-3p对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响。方法:体外分离培养人牙周膜干细胞,使用10、25、50 μmol/L GB处理细胞;按照脂质体法将anti-miR-NC、anti-miR-24-3p转染细胞内;将miR-NC、miR-24-3p转染细胞内,用50 μmol/L GB处理。用MTT检测细胞增殖。将各组细胞进行成骨诱导后,试剂盒检测ALP活性;Western blot检测PCNA、Osx、OPN和OCN蛋白表达;RT-qPCR检测miR-24-3p表达水平。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果:GB呈剂量依赖性增加人牙周膜干细胞增殖活性[48 h:(0.52 ± 0.05、0.64 ± 0.05、0.80 ± 0.08比0.33 ± 0.05);72 h:(0.72 ± 0.05、0.85 ± 0.04、1.08 ± 0.11比0.51 ± 0.06)]、ALP活性(0.45 ± 0.06、0.75 ± 0.08、1.12 ± 0.08比0.27 ± 0.05)、PCNA (0.41 ± 0.05、0.57 ± 0.06、0.78 ± 0.06比0.26 ± 0.04)、Osx (0.45 ± 0.06、0.68 ± 0.05、0.79 ± 0.03比0.33 ± 0.04)、OPN(0.56 ± 0.06、0.75 ± 0.05、0.92 ± 0.06比0.42 ± 0.05)、OCN蛋白表达(0.48 ± 0.05、0.59 ± 0.04、0.76 ± 0.08比0.30 ± 0.06),降低miR-24-3p表达水平(0.35 ± 0.04、0.52 ± 0.06、0.87 ± 0.06比1.00 ± 0.09)(P均< 0.05)。干扰miR-24-3p可增加48、72 h时人牙周膜干细胞增殖活性[(0.57 ± 0.06比0.35 ± 0.04)、(0.90 ± 0.10比0.47 ± 0.06)]、ALP活性(0.68 ± 0.05比0.30 ± 0.04)、PCNA (0.47 ± 0.05比0.29 ± 0.04)、Osx (0.50 ± 0.04比0.35 ± 0.04)、OPN (0.62 ± 0.05比0.39 ± 0.03)、OCN蛋白表达(0.75 ± 0.07比0.42 ± 0.06) (P均< 0.05)。与GB+miR-NC比较,GB+miR-24-3p干预的细胞48、72 h的OD值[(0.67 ± 0.05比0.82 ± 0.07)、(0.84 ± 0.05比1.10 ± 0.09)]、ALP活性(0.56 ± 0.04比1.15 ± 0.15)、PCNA (0.46 ± 0.06比0.79 ± 0.07)、Osx(0.52 ± 0.03比0.80 ± 0.05)、OPN (0.63 ± 0.04比0.91 ± 0.09)、OCN蛋白表达(0.45 ± 0.06比0.78 ± 0.08)降低(P < 0.05)。结论:GB可能通过降低miR-24-3p促进人牙周膜干细胞增殖和成骨分化。
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