换一批
换一批虎杖多糖中蛋白去除工艺及多糖的抗炎作用研究
Protein removal process and anti-inflammation effect of polysaccharides from Polygonum cuspidatum
摘要：
目的 优化虎杖多糖提取工艺,研究其对RAW264.7细胞活性的影响以及在脂多糖诱导的炎症过程中的作用机制.方法 用Sevage法对虎杖多糖粗提取物中游离蛋白进行处理,然后进行单因素实验,最后利用响应面法筛选虎杖多糖提取及除蛋白方案.将RAW264.7细胞分为正常组和不同浓度虎杖多糖组(5、10、20、40、80、120μg·mL-1),采用CCK-8试剂盒检测虎杖多糖对细胞活力的影响.将RAW264.7细胞分为空白组,模型组(100 μg·L-1脂多糖),不同浓度给药组(20、40、80 μg·mL-1虎杖多糖溶液),采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-(IL-6)分泌水平;采用Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-KBp65蛋白表达水平.结果 筛选得虎杖多糖最优提取方案为Sevage试剂与供试液体积比1∶4、振摇强度8档、振摇时间12 min、除蛋白4次.虎杖多糖质量浓度在20～40μg·mL-1内使细胞活力显著提升,对RAW264.7细胞生长有明显促进作用.与空白组相比,模型组细胞活力升高,TNF-α和IL-6分泌水平及TLR4、NF-κBp65和MyD88蛋白表达水平显著升高,表明巨噬细胞炎症模型构建成功.与模型组相比,虎杖多糖20、40、80 μg·mL-1组RAW264.7细胞活力显著降低.此外,在细胞上清液中发现TNF-α和IL-6分泌水平明显减少,并且TLR4、MyD88和NF-κBp65蛋白表达水平也显著降低.结论 虎杖多糖可以减少脂多糖诱导的RAW264.7细胞中TNF-α和IL-6分泌,抑制NF-κB信号通路可能是其发挥抗炎作用的一种机制.
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作者：
作者单位：
辽宁中医药大学药学院,辽宁 大连 116600
[1]
期刊：
《中南药学》2024年22卷8期 1999-2005页
ISTIC
关键词：
虎杖多糖响应面法RAW264.7细胞脂多糖炎症因子NF-κB信号通路Polygonum cuspidatum polysaccharideresponse surface methodRAW264.7 celllipopolysaccharideinflammatory factorNF-κB signaling pathway
分类号：
R285.5
栏目名称：
研究论文
DOI：
10.7539/j.issn.1672-2981.2024.08.006
发布时间：
2024-09-04
基金项目：
辽宁省科技厅博士启动项目
辽宁中医药大学大学生创新创业训练计划项目
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