检索历史 清除

目的 建立高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法监测人全血西罗莫司浓度,并将检测结果与均相酶免疫法进行比较.方法 100 μL全血样品加入10μL西罗莫司-D3内标、100μL0.1mol·L-1ZnSO4溶液、300 μL甲醇,涡旋离心后,上清液5μL进样.以0.1％甲酸-甲醇为有机相,0.1％甲酸-水(含10mmol·L-1乙酸铵)为水相,流速0.5mL·min-1,FastCore SuperC18(2.1 mm×100mm,2.6μm)色谱柱进行梯度洗脱分离.在多反应监测(MRM)模式下采用电喷雾离子源(ESI)正离子化方式检测,西罗莫司、内标的定量离子对分别为m/z 931.6＞864.6,m/z934.6＞864.6.进行方法学考察(包括特异性、定量下限、标准曲线、准确度、精密度、残留效应、基质效应、稳定性和回收率).测定94例器官移植患者的西罗莫司浓度,与均相酶免疫法结果进行比较.结果 西罗莫司标准曲线浓度范围为2.5～50ng·mL-1.西罗莫司的日内、日间准确度相对误差(RE)在-5.3％～7.5％,变异系数(CV)小于11.8％.低、中、高不同浓度的质控回收率和基质效应一致,经内标校正后回收率为100.22％～108.56％,经内标归一化后基质效应为95.45％～96.48％,CV小于7.0％.全血样本室温放置3 d,4 ℃放置3d,-20 ℃放置20d,反复冻融3次,处理后样本自动进样器放置20 h,室温放置24 h结果稳定.Passing-Bablok回归分析及Bland-Altman结果表明均相酶免疫法与UPLC-MS/MS两种西罗莫司测量方法存在比例偏差.结论 本研究建立了一种简单、高效的UPLC-MS/MS方法检测人全血西罗莫司浓度,均相酶免疫法与UPLC-MS/MS法检测人全血西罗莫司存在比例偏差.UPLC-MS/MS方法更加准确,是免疫抑制剂治疗药物监测检测金标准.