目的:探讨miR-582-5p对顺铂耐药鼻咽癌细胞增殖、侵袭与迁移的影响及其机制。方法:培养鼻咽癌顺铂耐药细胞株HNE1/DDP，分为对照组和miR-582-5p组；对照组转染miR-582-5p阴性对照试剂，miR-582-5p组转染miR-582-5p模拟物。2组细胞转染后培养48 h，收集细胞采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-582-5p、苏氨酸激酶3（AKT3）mRNA的表达，细胞计数（CCK）-8实验检测细胞活力，集落形成实验检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞运动能力，Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力，Western blot检测AKT3蛋白的表达情况。结果:（1）qRT-PCR检测对照组、miR-582-5p组miR-582-5p mRNA相对表达量分别为1.02±0.08、3.01±0.05，差异有统计学意义（ t=38.76， P<0.001）。（2）细胞活力检测结果显示，与对照组比较，miR-582-5p组细胞培养0 h光密度（OD）值差异无统计学意义（ P=1.000），培养24、48、72 h时的OD值均降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.001）。（3）细胞增殖能力检测结果显示，对照组和miR-582-5p组HNE1/DDP细胞菌落数分别是（362.3±13.1）、（155.7±5.0）个，差异有统计学意义（ t=25.59， P<0.001）。（4）细胞运动、侵袭、迁移能力检测结果显示，miR-582-5p组细胞迁移率、细胞侵袭数量、细胞迁移数量分别为62.0%±5.0%、（804.3±3.8）个、（631.0±1.0）个，对照组分别为29.3%±4.0%、（434.0±6.1）个、（373.3±7.6）个，差异均有统计学意义（ t=8.80、89.53、58.43， P值均<0.001）。（5）miR-582-5p组AKT3 mRNA、蛋白的相对表达量分别为0.99±0.07、1.34±0.02，对照组分别为0.59±0.04、0.60±0.03，差异均有统计学意义（ t=8.64、32.03， P值均<0.001）。 结论:上调miR-582-5p的表达可以抑制顺铂耐药鼻咽癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力，其机制可能与下调AKT3的表达有关。

目的 探讨miR-139-5p对鼻咽癌顺铂(DDP)耐药细胞DDP敏感性的影响及其相关作用机制.方法 培养鼻咽癌DDP耐药细胞株HNE1/DDP,分为miR-139-5p组、阴性对照组、DDP组和空白对照组,miR-139-5p组转染miR-139-5p类似物,阴性对照组转染阴性对照序列,DDP组和空白对照组不做转染处理.转染后miR-139-5p组、阴性对照组和DDP组均加入20μmol/L DDP,空白对照组加入培养基,溴化吡啶(PI)单染后流式细胞术检测各组HNE1/DDP细胞凋亡率.采用Western blot检测HNE1/DDP细胞miR-139-5p组、阴性对照组和空白对照组磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt及趋化因子受体4(CXCR4)蛋白的相对表达水平.采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-139-5p组、阴性对照组和空白对照组CXCR4 mRNA的表达水平.结果 空白对照组、DDP组、阴性对照组和miR-139-5p组HNE1/DDP细胞凋亡率分别是6.26％ ±1.19％、22.43％ ±3.88％、23.87％ ±3.21％和40.87％ ±4.04％,DDP组、阴性对照组和miR-139-5p组细胞凋亡率均高于空白对照组,miR-139-5p组细胞凋亡率高于DDP组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05).Western blot检测显示,miR-139-5p组p-Akt、p-PI3K、PI3K及CXCR4蛋白的相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.01).实时荧光定量PCR检测结果显示,miR-139-5p组中HNE1/DDP细胞CXCR4的mRNA相对表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.01).结论 转染miR-139-5p可提高鼻咽癌耐药细胞株HNE1/DDP对DDP的敏感性,其作用机制可能与抑制CXCR4的表达进而调控其下游PI3K/Akt信号通路的活化有关.

目的 明确长片段非编码RNA(lncRNA)X失活特异性转录本(XIST)对人鼻咽癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能的机制.方法 通过荧光定量PCR检测人鼻咽癌顺铂耐药HNE1细胞株(HNE1/DDP)中XIST的表达特征.采用MTT试验观察XIST上调和下调对HNE1/DDP细胞DDP耐药性的影响,并通过EdU试验和流式细胞技术观察其对HNE1/DDP细胞增殖和凋亡的影响.采用蛋白质印迹法检测XIST上调和下调对促凋亡因子程序性细胞死亡4(PDCD4)和Fas配体(Fas-L)蛋白表达的影响.结果 XIST在HNE1/DDP细胞的表达量显著高于HNE1细胞(0.57±0.06 vs 0.1±0.02,P<0.05).下调XIST的表达显著降低HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性(P<0.05),而上调XIST增加对DDP的耐药性(P<0.05).下调XIST的表达显著降低HNE1/DDP细胞增殖(6.17±1.93 vs 16.594.86,P<0.05)并诱导细胞凋亡[(18.04±4.72)％vs(4.22±1.65)％,P<0.05],而上调XIST增加细胞增殖(25.40±7.21 vs 13.16±3.95,P<0.05)并抑制细胞凋亡[(2.82±0.88)％vs(6.46±1.75)％,P<0.05].下调XIST的表达显著增加HNE1/DDP细胞中PDCD4(4.10±0.42 vs 1.0±0.12,P<0.05和Fas-L(3.070.29 vs 1.0±0.14,P<0.05)蛋白的表达,而上调XIST降低PDCD4(0.36±0.11 vs 1.0±0.18,P<0.05)和Fas-L(0.17±0.09 vs 1.0±0.21,P<0.05)蛋白的表达.结论 XIST在HNE1/DDP细胞中表达升高,下调和上调XIST的表达可分别降低和增加HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与PDCD4和Fas-L蛋白表达改变相关.

[目的]探究铁死亡激活剂Erastin联合顺铂(cisplatin,DDP)能否诱导鼻咽癌顺铂耐药细胞发生铁死亡.[方法] CCK-8法检测鼻咽癌普通细胞株HNE-1、CEN2Z、HONE-1和顺铂耐药株HNE-1/DDP对DDP以及Erastin的敏感性,CCK-8法测定Erastin、DDP联合处理后HNE-1/DDP细胞活性变化,流式细胞学检测细胞死亡及细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Fe2+和丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞Fe2+水平和MDA水平,Western blot检测铁死亡相关蛋白表达.[结果] HNE-I/DDP对DDP的敏感度远低于正常HNE-1细胞系,Erastin的IC50高达(45.89±6.89) μmol/L.流式细胞学结果显示Erastin或DDP单独处理HNE-1/DDP时,死亡率不超过30％,ROS水平增高不超过15％.Erastin联合DDP能使HNE-1/DDP细胞死亡率提高至89.69％±9.48％,ROS水平提高至18.72％±3.05％.联合处理还提高了细胞内Fe2+和MDA水平,降低了铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4 (recombinant glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达,且铁死亡抑制剂Ferrostatin-1能逆转Erastin联合DDP所诱导的细胞死亡,抑制ROS、Fe2+以及MDA水平的增高.[结论] Erastin联合DDP能通过降低GPX4表达诱导顺铂耐药株HNE-1/DDP铁死亡.