目的:研究抗氧化剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)对早期糖尿病大鼠视网膜结构和功能的保护作用及其机制。方法:选取8周龄健康清洁级雄性SD大鼠45只，采用随机数字表法将其分为正常对照组、糖尿病模型组和tBHQ干预组，每组15只；糖尿病模型组和tBHQ干预组采用一次性腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型，正常对照组大鼠腹腔内注射等容量枸橼酸钠缓冲液；tBHQ干预组在STZ注射前2周喂食质量分数为1% tBHQ添加饲料，其余2个组大鼠喂食普通饲料；分别于造模后72 h、2周和4周尾静脉采血用于血糖检测。取造模成功的大鼠于造模后4周行视网膜电图(ERG)检测；采用苏木精－伊红染色法观察大鼠视网膜组织形态结构变化；采用TUNEL法观察视网膜组织各层细胞凋亡情况；Western blot法检测视网膜组织中蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS的表达情况。另取体外培养的Müller细胞系rMC-1进行分组。正常对照组、甘露醇对照组、高糖组细胞分别在正常培养基、含5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇的培养基、高糖培养基中培养72 h。tBHQ干预组细胞先于含5 μmol/L tBHQ的正常糖培养基中预处理24 h，然后于含5 μmol/L tBHQ的高糖培养基中继续培养72 h；磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂组细胞先于含5 μmol/L LY294002的正常糖培养基中预处理6 h，然后于含5 μmol/L LY294002及5 μmol/L tBHQ的正常糖培养基中继续培养24 h，最后于含5 μmol/L LY294002及5 μmol/L tBHQ的高糖培养基中继续培养72 h，收集各组细胞提取蛋白，Western blot法检测Akt、p-Akt、eNOS和p-eNOS的表达情况。结果:造模后72 h、2周和4周，糖尿病模型组大鼠血糖较正常对照组和tBHQ干预组高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。造模后4周糖尿病模型组大鼠暗适应ERG的a波、b波振幅较正常对照组和tBHQ干预组下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。组织病理学染色结果显示，与正常对照组相比，糖尿病模型组视网膜神经节细胞数目减少，内丛状层水肿增厚，内核层及外核层变薄，结构疏松且排列紊乱，而tBHQ干预组各结构较糖尿病模型组有所改善。TUNEL染色结果显示，糖尿病模型组大鼠视网膜细胞凋亡指数较正常对照组和tBHQ干预组高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，且凋亡细胞主要存在于外核层。Western blot法检测结果显示，正常对照组、糖尿病模型组和tBHQ干预组大鼠视网膜组织p-Akt/Akt的相对表达量分别为0.76±0.11、0.52±0.10和1.14±0.31，p-eNOS/eNOS的相对表达量分别为0.83±0.06、0.52±0.08和1.03±0.13，糖尿病模型组大鼠视网膜组织p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的相对表达量均较正常对照组和tBHQ干预组降低，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、tBHQ干预组和PI3K抑制剂组细胞p-Akt/Akt的相对表达量分别为0.95±0.38、0.94±0.27、0.33±0.25、1.32±0.37和0.24±0.09，p-eNOS/eNOS的相对表达量分别为0.86±0.11、0.74±0.29、0.45±0.29、1.28±0.22和0.73±0.29，高糖组细胞p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的相对表达量较正常对照组和tBHQ干预组显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，PI3K抑制剂组p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的相对表达量较tBHQ干预组明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:tBHQ对早期糖尿病大鼠视网膜结构和功能均具有保护作用，其保护作用机制可能与Akt/eNOS信号通路的活化有关。

目的:探讨内毒素致急性肺损伤（ALI）时核因子E2相关因子2（Nrf2）对细胞紧密连接蛋白Claudin-18的影响。方法:将18只健康雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、内毒素致ALI模型组（ALI组）及Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚（tBHQ）预处理组（tBHQ+ALI组），每组6只。通过腹腔注射脂多糖（LPS）15 mg/kg制备小鼠内毒素致ALI模型；对照组注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）。tBHQ+ALI组于制模前3 h分3次腹腔注射tBHQ，每次间隔1 h（合计50 mg/kg），最后一次注射tBHQ的同时给予LPS 15 mg/kg；对照组和模型组给予等量PBS，最后一次给药时分别注射PBS或LPS。注射LPS后12 h处死小鼠取肺组织，苏木素?-?伊红（HE）染色后，光镜下观察肺组织病理学改变，并计算肺损伤评分；测定肺湿/干质量比值（W/D）；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织Nrf2蛋白表达；采用免疫组化法检测肺组织Claudin-18阳性表达。结果:对照组肺组织结构完整，无明显病理学改变。与对照组相比，ALI组肺泡间隔增宽，伴有炎症细胞浸润、毛细血管充血及组织水肿，肺损伤评分及肺W/D比值均明显升高〔肺损伤评分（分）：6.50±1.05比1.83±0.75，肺W/D比值：3.79±0.22比3.20±0.14，均 P<0.01〕，且肺组织Nrf2蛋白表达及Claudin-18阳性表达均明显降低〔Nrf2蛋白（Nrf2/β-actin）：0.41±0.33比1.22±0.33，Claudin-18（ A值）：0.28±0.07比0.44±0.10，均 P<0.05〕。tBHQ预处理后，肺组织病理损伤程度较ALI组明显减轻，肺泡间隔轻度异常，炎症细胞浸润及组织水肿减轻，肺损伤评分及肺W/D比值均明显降低〔肺损伤评分（分）：3.00±0.89比6.50±1.05，肺W/D比值：3.28±0.19比3.79±0.22，均 P<0.01〕，且肺组织Nrf2蛋白表达及Claudin-18阳性表达均明显升高〔Nrf2蛋白（Nrf2/β-actin）：1.26±0.09比0.41±0.33，Claudin-18（ A值）：0.45±0.04比0.28±0.07，均 P<0.05〕。 结论:Nrf2能通过上调Claudin-18表达减轻肺水肿，从而改善内毒素致ALI。

目的:观察叔丁基对苯二酚对脑缺血再灌注后大鼠线粒体通路第2个天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物（Smac）和凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。方法:2019年3-12月选取45只健康雄性SD大鼠，对大鼠进行随机编号并采用随机数表法分为假手术组、模型组与叔丁基对苯二酚组。通过结扎大鼠左颈动脉法建立脑缺血再灌注模型，并检测各组大鼠神经功能评分，剔除造模失败大鼠，每组各保留10只大鼠。分别于大鼠脑缺血再灌注后0.5 h、12 h对各组大鼠进行药物灌胃治疗，叔丁基对苯二酚组采用12.5 mg/kg叔丁基对苯二酚灌胃，假手术组与模型组采用等体积0.9%氯化钠注射液灌胃。再灌注24 h后，检测各组大鼠神经功能评分，之后处死大鼠，断头取脑。通过TUNEL法检测各组大鼠神经细胞凋亡情况；采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达水平；通过免疫组化法与蛋白质印迹法（Western blot）分别检测大鼠XIAP、Smac阳性细胞计数与蛋白表达水平。结果:叔丁基对苯二酚组大鼠神经功能评分为（1.36±0.49）分，明显低于模型组的（3.73±0.97）分（ t=6.896， P<0.001），缺血侧皮质区仍可见大量神经细胞凋亡，但数量少于模型组。模型组大鼠脑组织SOD水平明显低于假手术组，MDA、TNF-α、IL-1β水平明显高于假手术组［SOD：（51.94±3.46）U/mg<（70.68±2.67）U/mg， t=13.560， P<0.001；MDA：（5.69±0.78）nmol/mg>（1.20±0.96）nmol/mg， t=11.479， P<0.001；TNF-α：（89.36±9.84）pg/mg>（40.53±4.35）pg/mg， t=14.353， P<0.001；IL-1β：（41.35±6.79）pg/mg>（17.22±2.31）pg/mg， t=10.639， P<0.001］。叔丁基对苯二酚组大鼠脑组织SOD水平相对模型组明显上调，MDA、TNF-α、IL-1β水平明显下降［SOD：（51.94±3.46）U/mg<（68.84±5.03）U/mg， t=8.754， P<0.001；MDA：（5.69±0.78）nmol/mg>（2.46±0.48）nmol/mg， t=11.153， P<0.001；TNF-α：（89.36±9.84）pg/mg>（57.64±6.22）pg/mg， t=8.617， P<0.001；IL-1β：（41.35±6.79）pg/mg>（23.84±5.48）pg/mg， t=6.346， P<0.001］；模型组大鼠XIAP、Smac阳性细胞计数及表达水平均明显高于假手术组［阳性细胞计数：XIAP：（22.63±4.37）>（12.39±3.18）， t=5.992， P<0.001；Smac：（47.58±6.94）>（5.64±1.35）， t=18.759， P<0.001，蛋白表达量：XIAP：（0.53±0.08）>（0.24±0.05）， t=9.721， P<0.001；Smac：（0.92±0.15）>（0.36±0.05）， t=11.200， P<0.001］，叔丁基对苯二酚组大鼠XIAP阳性细胞计数及表达水平均明显高于模型组，Smac阳性细胞计数及表达水平均明显低于模型组［阳性细胞计数：XIAP：（36.78±5.26）>（22.63±4.37）， t=6.543， P<0.001；Smac：（31.74±4.26）<（47.58±6.94）， t=6.151， P<0.001，蛋白表达量：XIAP：（0.79±0.10）>（0.53±0.08）， t=6.420， P<0.001；Smac：（0.70±0.09）<（0.92±0.15）， t=3.977， P<0.001］。 结论:叔丁基对苯二酚能够有效减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，降低脑组织氧化应激及炎性反应，其作用可能与调节XIAP、Smac信号通路有关。

目的 探讨转录因子 NF-E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)对氯化镉所致大鼠睾丸和卵巢内质网应激的反馈调节作用.方法 将 48 只 SD大鼠随机分为对照组,氯化镉低、中、高剂量组,叔丁基对苯二酚(tert-bu-tylhydroquinone,tBHQ)组,tBHQ+氯化镉低、中、高剂量组,共 8 组,每组 6 只.对照组、tBHQ组分别给予腹腔注射 0.9%生理盐水、20 mg/kg体重 tBHQ溶液;氯化镉低、中、高剂量组分别腹腔注射 1.14、2.28、4.56 mg/kg 体重氯化镉溶液;tBHQ+氯化镉低、中、高剂量组于氯化镉染毒前 120 min先行腹腔注射 20 mg/kg体重 tBHQ溶液后,分别腹腔注射 1.14、2.28、4.56 mg/kg体重氯化镉溶液.染毒 48h后处死动物,取睾丸、卵巢组织,采用 RT-PCR 和 Western blot法测定 Bip、PERK、Nrf2 mRNA 和蛋白的表达水平.结果 与 tBHQ组比较,tBHQ+氯化镉中剂量组大鼠睾丸 Nrf2 mRNA和蛋白表达明显上调(F值分别为 144.47、302.88,P<0.05),tBHQ+氯化镉低、中、高剂量组大鼠卵巢 Nrf2 mRNA 和蛋白表达均明显上调(F 值分别为 55.97、80.08,P<0.05);与同剂量氯化镉组比较,tBHQ+氯化镉中剂量组大鼠睾丸 Nrf2 蛋白表达明显上调(F=74.66,P 值<0.05),此剂量组大鼠睾丸 Bip、PERK表达水平无显著变化;tBHQ+氯化镉高剂量组大鼠卵巢 Nrf2 蛋白表达明显上调(F= 30.58,P<0.05),大鼠卵巢 Bip mRNA 和蛋白、PERK mRNA 表达均出现不同程度的下调(F 值分别为 33.13、25.28、30.24,P<0.05),且大鼠卵巢Nrf2 蛋白表达与 Bip mRNA、PERK mRNA表达均呈负相关关系(r值分别为-0.783、-0.817,P<0.05),tBHQ+氯化镉高剂量组大鼠睾丸 PERK、Nrf2 mRNA和 Bip、PERK、Nrf2 蛋白的表达均明显低于氯化镉高剂量组(F 值分别为 19.73、53.63、25.28、99.98、74.66,P<0.05).结论 在不同氯化镉染毒剂量条件下,tBHQ的干预可不同程度地诱导大鼠睾丸和卵巢的 Nrf2 表达;大鼠卵巢 Nrf2 表达的上调,可通过 PERK/Nrf2 途径减轻 ERS水平,以改善镉对卵巢组织的损害.

目的 建立药用辅料聚乙二醇6000中4种抗氧剂的定量测定方法,为聚乙二醇6000的质量控制提供技术支撑.方法 采用气质联用(GC-MS/MS)法同时检测聚乙二醇6000 中 2,6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT)、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、2,6-二叔丁基-4羟基苯酚(Ionox-100)4种抗氧剂的含量.使用DB-5 MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);多反应监测(MRM)模式.结果 4 种抗氧剂相关系数在 0.9996～1.000;平均回收率(n = 6)为 92.7%～101.3%,RSD为 2.2%～3.0%.结论 该方法灵敏度高、专属性强,适用于聚乙二醇6000中4种抗氧剂的检测.

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)在大鼠急性矽尘暴露中的保护效果及可能机制.方法 将无特定病原体(SPF)级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组32只.模型组与干预组采用一次性非暴露气管染尘法建立大鼠矽尘模型,干预组以质量分数为1％的tBHQ溶液进行干预,对照组以1％的生理盐水进行干预,1次/d.各组分别于3、14、28、60 d处死8只大鼠,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子(TGF)-β含量,用比色法测定大鼠肺组织和血清中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力.结果 与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织中IL-1含量均随时间延长而升高,模型组大鼠肺组织中IL-1含量在60d时达到最高,干预组大鼠肺组织中IL-1含量在28 d时达到最高,除3d外差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,除3d外,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织中TNF-α含量均增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织中HYP、TGF-β含量均随时间延长而升高,在60 d时达到最高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,28、60d干预组大鼠肺组织中IL-1、HYP、TGF-β含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织和血清中MDA的含量均随着时间延长而升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,各个时间点干预组大鼠肺组织中MDA的含量均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个时间点模型组和干预组大鼠肺组织和血清中GSH-PX活力均随着时间延长而降低,除3d外差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ的干预可以在一定程度上减轻大鼠接触矽尘的氧化应激损伤,提高机体的抗氧化损伤能力,降低肺组织IL-1、TNF-α、TGF-β、HYP的含量,对于急性矽尘接触导致的肺组织炎症和纤维化具有一定的阻碍和抑制作用.

目的:探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)和莱菔硫烷(SEN)在患有创伤性脑损伤大鼠的疗效差异性.方法:80只健康成年的雄性SD大鼠分为假手术组、常规损伤组、tBHQ治疗组和SFN治疗组,使用电子颅脑损伤仪(eCCI)制备TBI模型.其中tBHQ治疗组在伤前24 h大鼠腹腔注射三次tBHQ(50 mg/kg),每8h一次;SFN治疗组在伤后15 min给予腹腔注射SFN(5 mg/kg).给药24h后,采用mNSS方法评价各组大鼠神经功能缺损状况,利用干湿称量法计算脑含水量,Western blot和ELISA方法分别测定大鼠脑组织的NOX2和Nrf2的表达水平.结果:损伤发生后第24 h,tBHQ治疗组和SFN治疗组在mNSS评分((4.5±0.71)vs(9.2±0.79),(6.0± 0.82) vs (9.2± 0.79))、脑水肿(79.4％ vs 85.6％,80.3％ vs 85.6％)、NOX2和Nrf2(0.93 ng/mL vs 0.81 ng/mL,0.87 ng/mLvs 0.81 ng/mL)表达上与常规损伤组差异明显,而tBHQ治疗组和SFN治疗组间在mNSS评分((4.5±0.71)vs(6.0±0.82))、NOX2和Nrf2(0.93 ng/mL vs 0.87 ng/mL)表达上差异显著.结论:在大鼠TBI模型中,tBHQ和SFN均可以有效的降低机体自身的氧化应激作用,并改善神经功能,但tBHQ的疗效要好于SFN.

目的:初步探讨大鼠急性一氧化碳中毒迟发性脑病(DEACMP)模型中干预剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)前后脑组织海马区核因子E2相关因子2(Nrf2)及其下游靶基因血红素加氧酶1(HO-1)的变化,从而进一步研究DEACMP的发病机制,同时为其靶向治疗的研究提供一定的实验基础.方法:将240只大鼠按随机数字表法分为一氧化碳中毒组(CO组)、空气对照组(AC组)、一氧化碳+3%乙醇组(EC组)、一氧化碳+tBHQ组(TC组),再将各组大鼠按染毒后1、3、7、14、21、28 d随机分为6个亚组,随后用Morris水迷宫试验观察大鼠行为学表现,免疫组织化学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠干预剂tBHQ前后Nrf2及HO-1的表达变化,TUNEL染色检测细胞凋亡情况.结果:CO组、EC组、TC组大鼠海马区Nrf2及HO-1表达均表现为染毒后第1天升高,3 d达高峰,随后逐渐下降的趋势,各时间点与AC组比较差异均有统计学意义,TC组与CO组比较Nrf2及HO-1表达增高,各亚组比较差异均有统计学意义.CO组、EC组、TC组大鼠与AC组比较凋亡细胞随时间明显增多,且均表现为增高-高峰(7~14 d)-降低的趋势,TC组与CO组比较凋亡细胞(7~14 d)减少,差异有统计学意义.结论:DEACMP的发生发展中Nrf2/ARE/HO-1通路起着重要作用,tBHQ特异性激活Nrf2通路达到早期保护作用,有望减少或减轻DEACMP.

目的 探讨切口痛-瑞芬太尼痛敏模型大鼠脊髓内核因子E2相关因子2(Nrf2)-自噬通路在痛觉过敏中的作用.方法24只雄性SD大鼠依随机数字表法分为3组:盐水+切口痛组(I组)、切口痛-瑞芬太尼痛敏组(RI组)、Nrf2激动剂t-BHQ组(t-BHQ组),每组8只.I组和RI组建模前分别经尾静脉输注生理盐水0.1 mL/(kg·min)和瑞芬太尼1 μg/(kg·min),连续输注60 min.t-BHQ组于输注瑞芬太尼前0.5 h腹腔注射t-BHQ(15 mg/kg),12 h 1次,连续4次,余处理同RI组.3组输注同时于双侧后足建立Brennan切口痛模型.分别于输注前24 h(T0)、输注后2 h(T1)、6 h(T2)、24 h(T3)和48 h(T4)测定大鼠机械刺激缩足阈值(PWT)及热刺激缩足潜伏期(PWL).测试完毕后将大鼠处死,取L4~6脊髓节段,Western blot法测定脊髓自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin-1、Nrf2及其下游分子血红素氧化酶1(HO-1)表达水平.结果 随着处理时间的延长,3组PWT、PWL呈总体下降的趋势.从T1开始,与I组相比,RI组PWT下降、PWL缩短,T4时LC3Ⅱ、Beclin-1表达升高、Nrf2、HO-1蛋白表达降低(P<0.05);与RI组相比,tBHQ组PWT升高、PWL延长(P<0.05),同时Nrf2、HO-1、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均明显升高(P<0.05).结论 Nrf2-自噬通路的激活可明显改善切口痛-瑞芬太尼诱导的痛觉过敏.

采用水蒸气蒸馏法提取豆腐柴叶的挥发油,通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)对挥发油进行化学成分分析,并以还原能力、对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力及抑制微生物生长为评价指标,研究其体外抗氧化和抑菌作用.结果表明,从豆腐柴叶挥发油中共分离鉴定出化合物有26种,占挥发油总量的98.10％,主要成分有丙酸乙酯(33.70％)、2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(9.38％)、叶绿醇(7.91％)、α-桉叶醇(3.75％)、角鲨烯(3.39％)和棕榈酸(3.34％)等.豆腐柴叶挥发油具有较强的抗氧化活性,其还原能力和对DPPH、ABTS自由基清除能力随其浓度的增加而增强;对DPPH、ABTS自由基清除作用的半数抑制浓度(IC50)分别为3.396 mg/mL和0.761 mg/mL.豆腐柴叶挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌均有显著抑制作用,挥发油的质量浓度与对4种受试菌的抑制作用呈量效关系,其最低抑制浓度(MIC)均为1.125 mg/mL.故豆腐柴叶挥发油具有较好的抗氧化和抑菌特性,为其在食品和药品方面的研究与应用提供了理论基础.