目的 利用内蒙古道地中药材资源优势,从天然植物草药中寻找高效、低毒的α-葡萄糖苷酶抑制剂,为药食同源的降糖药物开发提供研究基础.方法 以对硝基苯基-α-D葡萄糖吡喃苷(PNPG)为底物,建立α-葡萄糖苷酶抑制剂体外筛选模型,并对中药材水提物进行筛选.对抑制活性较高的中药材水提物进行酶动力学实验,考察其作用机制,同时对其主要成分进行分析.结果 50种中药材中,共筛选出α-葡萄糖苷酶抑制效果强于对照的中药材13种,分别是地榆、锁阳、麻黄、大黄、赤芍、紫草、沙苑子、蒺藜、黄芩、关黄柏、桔梗、升麻、甘草,其中锁阳和地榆的半抑制浓度分别为0.005 16 mg/ml和0.001 74 mg/ml,表现最为突出.二者的动力学研究显示,锁阳和地榆水提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用都是可逆的,其作用类型属于线性混合型抑制,水提物与阿卡波糖的联合抑制均表现为拮抗作用.成分分析显示,地榆的总黄酮、总多糖、总多酚、总皂苷含量均高于锁阳,两种药材水提物中生物活性成分的含量都表现为总黄酮＞总多糖＞总多酚＞总皂苷.结论 地榆、锁阳、麻黄等天然中药材水提物具有一定的体外降糖效果,可以明显抑制α-葡萄糖苷酶活性.

目的 优化消肿止痒方提取工艺.方法 以加水量、提取次数、提取时间为影响因素,苦参碱、氧化苦参碱、没食子酸、鞣花酸、铁屎米酮、地榆皂苷Ⅰ含量及浸膏得率为评价指标,正交试验优化提取工艺.结果 最优条件为18倍量水提取2次,每次2 h,苦参碱、氧化苦参碱、没食子酸、鞣花酸、铁屎米酮、地榆皂苷Ⅰ含量及浸膏得率分别为0.185、0.435、3.289、0.834、0.227、0.525 mg/mL及28.91％.结论 该方法稳定可行,可为消肿止痒方后续工业化生产及其配方颗粒制备提供参考依据.

目的 探究不同产地蒙古黄芪Astragalus membranaceus主要药效成分的含量差异,以及不同药效成分含量与经纬度、光照、温度、水分等地理气候因子的相关性.方法 基于HPLC法测定了甘肃定西、山西大同、陕西榆林等7个产地蒙古黄芪的黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ等4种皂苷类成分和毛蕊异黄酮、芒炳花素等8种黄酮类成分的含量,通过方差分析比较各产地蒙古黄芪成分含量的差异,并采用相关性分析及通径分析探究地理气候因子与成分含量的相关性.结果 不同产地蒙古黄芪的12种药效成分含量均存在显著差异,其中山西大同产黄芪的黄芪皂苷、黄酮苷类成分含量较高,甘肃定西产黄芪的黄酮苷元类成分含量较高.相关性分析结果表明,在经度较高的地区有利于黄芪皂苷及黄酮苷类成分的积累,在经度较低地区有利于黄酮苷元类成分的积累.进一步通径分析结果表明,经度对药效成分的影响主要与降水量和光照条件有关.此外,9月较高的太阳辐射和4月较少的降水量有利于黄酮苷类成分的积累.结论 皂苷及黄酮类成分含量在不同产地的蒙古黄芪间差异显著,经度、9月太阳辐射和4月降水量对上述成分的积累影响较大.

目的 探讨地榆皂苷Ⅱ抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡和自噬的作用机制.方法 采用不同浓度(0、10、20、40 μmol/L)地榆皂苷Ⅱ处理人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞,通过CCK-8和EdU实验观察地榆皂苷Ⅱ对HepG2和Hepa1-6细胞增殖的影响;运用流式细胞术检测地榆皂苷Ⅱ对细胞凋亡的影响;通过Western blotting检测地榆皂苷Ⅱ对细胞凋亡和自噬相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteine-aspartic acid protease-3,Caspase-3)、Caspase-8、Caspase-9、B 细胞淋巴瘤 2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2-associatedXprotein,Bax)、cleaved Caspase-3、微管相关蛋白 1A/1B-轻链 3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain3-Ⅱ,LC3Ⅱ)、微管相关蛋白 1A/1B-轻链 3-Ⅰ(microtubule-associated protein light chain3-I,LC3I)、自噬相关蛋白 p62、Beclin1 及蛋白激酶 B(proteinkinaseB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路关键蛋白表达的影响.结果 地榆皂苷Ⅱ显著抑制HepG2和Hepa1-6细胞活力,且呈现一定的剂量相关性;流式细胞检测发现地榆皂苷Ⅱ给药后细胞凋亡率显著增加(P＜0.01、0.001);Western blotting结果显示,与对照组比较,地榆皂苷Ⅱ给药后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2表达显著降低(P＜0.05、0.01、0.001),cleavedCaspase-3、Bax 蛋白表达显著升高(P＜0.05、0.01),LC3Ⅱ/LC3I 值显著升高(P＜0.05、0.01、0.001),Beclin1蛋白表达量显著升高(P＜0.05、0.01),p62蛋白表达量显著下降(P＜0.05、0.01),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值显著降低(P＜0.05、0.01、0.001).结论 地榆皂苷Ⅱ通过Akt/mTOR通路诱导HepG2和Hepa1-6细胞自噬和凋亡实现对肝癌细胞增殖的抑制,为抗肝细胞癌新药发现提供药理学证据.

目的 研究地榆皂苷Ⅰ对大鼠膝骨关节炎的作用机制.方法 选择SD雄性乳鼠8只,提取乳鼠软骨细胞,采用CCK-8实验检测细胞增殖率以确定最佳药物浓度.将软骨细胞随机分为对照组、炎症组和治疗组,对照组在完全培养基中进行培养,炎症组在含有10 μg/mL白细胞介素-1β(IL-1β)的培养基中培养,治疗组在含有10 μg/mL IL-1β和最佳浓度地榆皂苷Ⅰ的培养基中培养.采用Calcein-AM/PI染色观察各组软骨细胞生长情况.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组软骨细胞中白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶13(MMP13)mRNA相对表达量.取8周龄左右的SD雄性大鼠24只随机分为对照组、炎症组和治疗组,每组8只,对炎症组和治疗组建立骨关节炎模型,建模完成4周后,炎症组和对照组的关节腔内注射等体积生理盐水,治疗组的关节腔内注射100 pL最佳浓度的地榆皂苷Ⅰ溶液,1次/周,连续给药4周.采用HE染色和番红O-固绿染色观察各组膝关节组织结构.采用免疫组化染色观察各组膝关节组织中IL-6、MMP13蛋白表达情况.结果 CCK-8实验结果显示,各实验浓度均未表现明显细胞毒性,当地榆皂苷Ⅰ的浓度为20 mg/L时,软骨细胞增殖率最高.Calcein-AM/PI染色结果显示,炎症组和治疗组细胞增殖率低于对照组,治疗组细胞增殖率高于炎症组,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-qPCR检测结果显示,炎症组和治疗组IL-6、MMP13 mRNA相对表达量高于对照组,治疗组IL-6、MMP13 mRNA相对表达量低于炎症组,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色和番红O-固绿染色结果显示,对照组的膝关节组织结构比炎症组和治疗组完整,与炎症组相比,治疗组膝关节组织损伤有所减轻.免疫组化染色结果显示,炎症组IL-6、MMP13蛋白表达水平最高,治疗组IL-6、MMP13蛋白表达水平高于对照组.结论 地榆皂苷Ⅰ可通过维持软骨细胞活力、降低炎症因子的释放以及减少软骨细胞外基质(ECM)的降解发挥抗炎作用,对膝骨关节炎有一定的药用潜力.

目的 探讨地榆皂苷Ⅰ对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制.方法 人卵巢癌A2780细胞分别用7.5、15.0、30.0μmol/L的地榆皂苷Ⅰ处理,同时设置si-NC组、si-IGFL2-AS1组、地榆皂苷Ⅰ+pcDNA-IGFL2-AS1组、地榆皂苷Ⅰ+pcDNA组;MTT检测细胞增殖抑制率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数:Transwell法检测迁移和侵袭细胞数;Western blotting法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告实验检测IGFL2-AS1和miR-138-5p的靶向关系.结果 不同浓度的地榆皂苷 Ⅰ处理A2780细胞后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱(P＜0.05),E-cadherin 和 miR-138-5p 表达上调(P＜0.05),N-cadherin 和 IGFL2-AS1 表达下调(P＜0.05),呈剂量相关性.下调 IGFL2-AS1抑制A2780增殖、迁移及侵袭(P＜0.05).IGFL2-AS1靶向调控miR-138-5p,过表达IGFL2-AS1可减弱地榆皂苷 Ⅰ对A2780细胞增殖、迁移和侵袭的作用(P＜0.05).结论 地榆皂苷Ⅰ通过调控IGFL2-AS1/miR-138-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移.

目的:观察地榆皂苷Ⅱ逆转人神经母细胞瘤细胞对顺铂耐药的作用并探讨其机制.方法:建立对顺铂耐药的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP,采用CCK-8 法测定地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的直接抑制作用及对SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP耐药性的逆转作用,Transwell 小室实验和划痕试验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞侵袭和迁移能力的影响,流式细胞术测定地榆皂苷Ⅱ对细胞周期和细胞凋亡的影响,qRT-PCR和Western Blot测定地榆皂苷Ⅱ对细胞中Cdc2 和AKT/PI3K信号通路mRNA和蛋白表达的影响.结果:地榆皂苷Ⅱ可浓度依赖性地抑制SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP增殖,改善顺铂对耐药人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP增殖的抑制作用,并抑制其侵袭、迁移能力,促进其发生G2/M期阻滞及凋亡,降低其p-Cdc2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白和Cdc2、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达.结论:地榆皂苷Ⅱ可逆转人神经母细胞瘤对顺铂的耐药,其作用机制可能与抑制细胞侵袭和迁移,促进G2/M期阻滞和细胞凋亡,抑制调控细胞周期蛋白Cdc2 和PI3K/AKT信号通路有关.

目的 探讨地榆皂苷Ⅱ对结肠癌细胞HT-29增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用并探讨其作用机制.方法 采用CCK-8法检测地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的影响,采用划痕试验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞迁移能力的影响,采用Transwell小室实验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术测定地榆皂苷Ⅱ对细胞凋亡的影响,分别采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法测定地榆皂苷D对细胞中蛋白激酶B(AKT)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路mRNA和蛋白表达的影响.结果 地榆皂苷Ⅱ(0、1、5、10、20、40、60和80 μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的增殖;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20 μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的迁移能力;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20 μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的侵袭能力;地榆皂苷D(5、10和20 μmol/mL)可剂量依赖性促进结肠癌细胞HT-29的凋亡;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20 μmol/mL)可剂量依赖性降低结肠癌细胞HT-29中AKT和PI3K mRNA的表达,增加Caspase-3和Caspase-9 mRNA的表达;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20 μmol/mL)可剂量依赖性地降低结肠癌细胞HT-29中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)蛋白的表达,增加Cleaved-Caspase-3和Cleaved-Caspase-9蛋白的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 地榆皂苷Ⅱ具有抑制结肠癌细胞HT-29的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡作用,可能与其促进AKT和PI3K蛋白磷酸化、Caspase-3和Caspase-9蛋白活化而调节AKT/PI3K信号通路有关.

目的 研究地榆皂苷Ⅰ对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞作用及相关的分子机制.方法 MTT法检测地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖的作用;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平;JC-1染色检测线粒体膜电位;试剂盒检测Caspase活性.结果 地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖有显著抑制作用,且呈浓度依赖性(P＜0.05),IC50为28.99 μmol/L.地榆皂苷Ⅰ可显著诱导BCPAP细胞凋亡,且凋亡率随着药物浓度的升高而显著升高,呈剂量依赖性.地榆皂苷Ⅰ可提高Bax/Bcl-2比率,降低线粒体膜电位,促使细胞色素C从线粒体内的释放,提高Caspase-9和Caspase-3活性.结论 地榆皂苷Ⅰ通过激活线粒体通路导致人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖受到抑制并诱导细胞凋亡.

目的 测定不同地区地榆饮片中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的含量.方法 采用Thermo Synoronis C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流速为1.0 mL·min-,检测波长为203 nm,柱温为35℃,流动相A为0.1％磷酸水,流动相B为乙腈,梯度洗脱.结果 所选取的7个省18批地榆饮片样品中地榆皂苷Ⅰ含量在3.1％～7.7％,地榆皂苷Ⅱ含量在0.16％～0.87％,不同产地地榆饮片中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ含量存在差异.结论 本方法精密度、重复性、稳定性都符合规定要求,适用于地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的含量测定;可将地榆皂苷作为地榆的质控指标之一,以填补药典无地榆皂苷含量测定的空白.