目的:观察黄芪甲苷（astragaloside IV，AS-IV）联合糖皮质激素干预治疗嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside，PAN）肾病大鼠的疗效，并探讨其相关机制。方法:40只150~180 g无特定病原体级健康雄性Wistar大鼠被随机分为对照组、模型组（PAN组）、黄芪甲苷干预组（PAN+AS-IV组）、甲泼尼龙（MP）干预组（PAN+MP组）和AS-IV+MP干预组（PAN+AS-IV+MP组）。采用单次尾静脉注射50 mg/kg PAN的方法建立PAN肾病模型。药物干预组于造模同时分别给予40 mg·kg -1·d -1 AS-IV灌胃和15 mg·kg -1·d -1 MP腹腔注射，连续治疗10 d，实验第11天收集各组大鼠血液、24 h尿液和肾组织标本。用全自动生化仪检测尿蛋白量、尿肌酐、血清白蛋白（Alb）水平；Western印迹法检测足细胞标志蛋白nephrin、Rho家族蛋白RhoA、Rac/Cdc42的相对表达量；免疫荧光法检测各组大鼠肾组织nephrin、synaptopodin蛋白的表达。 结果:与对照组比较，PAN组大鼠尿蛋白/肌酐比值（uPCR）显著升高，Alb水平显著降低，足细胞标志蛋白nephrin相对表达量明显下调，RhoA、Rac/Cdc42蛋白相对表达量显著上调（均 P<0.01）。与PAN组比较，PAN+AS-IV组和PAN+AS-IV+MP组血清Alb水平显著升高（均 P<0.01），PAN+MP组（ P<0.05）和PAN+AS-IV+MP组（ P<0.01）uPCR显著降低。Western印迹结果显示，与PAN组比较，各药物干预组（PAN+AS-IV组、PAN+MP组和PAN+AS-IV+MP组）肾组织nephrin相对表达量显著升高，RhoA、Rac/Cdc42相对表达量显著降低（均 P<0.01）。免疫荧光结果显示，PAN组足细胞标志蛋白nephrin、synaptopodin表达较对照组明显减少，各药物干预组肾组织nephrin、synaptopodin表达较PAN组均升高，其中PAN+AS-IV+MP组改善最显著。 结论:AS-IV及糖皮质激素均可改善PAN诱导的肾足细胞损伤，且两者联合使用有协同增强的保护作用，可能与抑制Rho家族信号的激活有关。

目的:探讨二参真武汤对心肾阳虚型慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌能量代谢的影响.方法:60只大鼠随机选取8只设为空白组,剩余52只通过甲状腺切除后给予0.02％阿霉素腹腔注射建立CHF模型,将建模大鼠随机分为模型组、阳性对照组、二参真武汤低剂量组、二参真武汤高剂量组,每组8只,连续灌胃28 d.给药结束后,ELISA法测空白组、模型组血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、氨基末端B型利钠肽(NT-proBNP)和各组心肌组织腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、腺嘌呤核苷二磷酸(ADP)、B型脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP 酶.彩色多普勒心脏超声检测心功能;HE染色法观察心脏病理形态;天狼星染色法观察心肌胶原纤维沉积形态;电镜观察心肌线粒体超微结构.结果:造模后大鼠血清NT-proBNP上升,T3、T4下降(均P＜0.01).与空白组相比,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)下降,左室收缩末期内径(LVIDs)、左心室收缩末期容积(LVESV)上升(均P＜0.01).ATP、ADP、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶下降,BNP、CK-MB上升(均P＜0.01).心肌细胞肿胀,边缘模糊,胶原纤维沉积增多,线粒体数量减少、嵴模糊.与模型组相比,阳性对照组及二参真武汤低剂量组、二参真武汤高剂量组LVEF、LVFS上升、LVIDs、LVESV下降,ATP、ADP、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶上升,BNP、CK-MB下降(均P＜0.01);肿胀心肌细胞减少,胶原纤维沉积面积缩小,心肌线粒体损伤减轻.结论:二参真武汤可有效改善CHF大鼠心肌损伤,对心脏有保护作用,其机制可能是通过调节ATP、ADP改善心肌能量代谢.

目的 探讨氟喹诺酮类杂化物的抗菌及抗耐药的研究进展.方法 检索PubMed(检索时限为2010年1月至2023年4月)、中国知网及万方数据库(检索时限为2019年1月至2023年4月)有关氟喹诺酮类杂化物抗菌及抗耐药的相关研究,汇总并分析氟喹诺酮类化合物的关键成药性信息,以及氟喹诺酮类杂化物杂化设计和抗菌活性.结果 采用标准化合成新型抗菌药的杂化策略,基于氟喹诺酮类独特的构效关系,以氟喹诺酮母核为基础,对各位点进行化学结构修饰而成的杂化物可发挥抗菌效果,特别是对多重耐药细菌菌株的抑制作用明显.杂化策略往往通过增加膜的通透性、减少细菌细胞外排、抑制蛋白合成等来提高抗菌活性,并延缓耐药性形成.氟喹诺酮类可与喹诺酮类、噁唑烷酮类、四环素类、氨基苷类、阿奇霉素、磺胺类、噁二唑、甲氧苄啶、利福霉素、异烟肼等抗菌药物发生杂化,也可与腺嘌呤核苷三磷酸竞争性抑制剂、苯并咪唑、黄酮类、1,2,4-苯三唑、糖、靛红等非抗菌药物进行杂化.结论 大多数氟喹诺酮类杂化物仍处于临床试验阶段,为对抗细菌耐药性和开发新型抗菌药物提供了选择,成药潜力可观.

目的 通过蛋白质组学探究RAB7作为线粒体自噬生物标志物对肾小球足细胞线粒体自噬的影响.方法 将6只SD大鼠随机分为对照组和模型组(n=3),尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎(CGN)模型.采用蛋白质组学技术联合自噬数据库鉴定CGN大鼠的差异自噬相关蛋白.体内采用Western blot方法验证相关蛋白的表达,体外采用嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导肾小球足细胞损伤模型,使用免疫荧光、透射电镜、Western blot等方法检测线粒体自噬变化.结果 共筛选出12个自噬相关蛋白,其中RAB7 degree值最高.体内经Western blot验证的SNRPE、CTNNBI、CAT、RAB7A、SOD2蛋白表达水平与蛋白质组学数据一致.体外实验中,与正常组比较,模型组中RAB7、Parkin和PINK 1蛋白表达水平降低(P＜0.01);RAB7过表达后,与正常组比较,模型组中自噬标志物LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达水平升高(P＜0.01),P62蛋白表达水平降低(P＜0.01).结论 RAB7可能是CGN中线粒体自噬生物标志物,影响肾小球足细胞线粒体自噬.

通过非靶向尿液代谢组学技术研究毛蕊花糖苷对嘌呤霉素氨基核苷肾病(purinomycin aminonucleoside nephropathy,PAN)幼龄大鼠的内源性代谢特征,初步探讨其潜在的作用机制.采用全自动生化仪检测各组大鼠尿液生化指标含量;采用超高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)联合主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis,OPLS-DA)等寻找筛选潜在生物标志物及相关核心代谢通路.使用MetaboAnalyst 5.0 平台绘制工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线来评估核心代谢物临床诊断效能.结果显示,毛蕊花糖苷显著降低PAN幼龄大鼠尿蛋白/尿肌酐比值.PAN幼龄大鼠模型非靶向尿液代谢组学共筛选出 17 种差异代谢物,涉及到的通路有苯丙氨酸代谢以及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成;毛蕊花糖苷干预PAN幼龄大鼠共筛选出 13 种差异代谢物,涉及到的通路有苯丙氨酸代谢以及精氨酸和脯氨酸代谢,其中,毛蕊花糖苷治疗后可显著回调的差异代谢物有亮氨酰脯氨酸和苯乙酮.这些通路主要揭示了毛蕊花糖苷干预PAN幼龄大鼠的主要作用机制为氨基酸代谢.ROC曲线进一步分析出的 2 种核心生物标志物亮氨酰脯氨酸和苯乙酮的曲线下面积均大于 0.9.综上所述,毛蕊花糖苷可能通过回调内源性差异代谢物调控氨基酸代谢相关通路治疗PAN幼龄大鼠,这将有助于初步阐明毛蕊花糖苷治疗儿童慢性肾小球肾炎的干预机制.同时提取出的特征性生物标志物对于评估毛蕊花糖苷治疗儿童慢性肾小球肾炎具有较高的诊断价值.

目的 利用CRISPR/Cas9技术在肺癌细胞系A549和NCI-H3255中敲除凋亡诱导因子1(AIFM1)基因,并通过筛选,获得稳定的细胞株.方法 利用在线数据库GEPIA、CPTAC、Prognosis和SangerBox分析AIF在肺癌的表达和功能.以AIFM1基因为靶点,设计向导RNA(sgRNA)并利用CRISPR RGEN Tools分析其脱靶效率,CRISPR/Cas9技术敲除肺癌细胞的AIFM1基因和倍比稀释法筛选稳定的单克隆细胞株.采用Western blot检测细胞AIF表达水平.结果 TCGA和GTEx数据集结果显示,AIF蛋白在肺癌组织阳性表达率比正常组织高,差异有统计学意义(P＜0.05);单因素cox和多因素cox分析发现,pT分期和pN分期是独立危险因素(P＜0.05);CPTAC数据库显示,与正常阶段相比,AIF蛋白在肺癌的不同分级分期阶段的表达增加(P＜0.05).AIFM1基因在TCA循环、亨廷顿氏症疾病、氨基酸-核苷酸-糖的代谢和氧化性磷酸化通路中富集显著,差异有统计学意义(|NES|＞1,P＜0.05);3条sgRNA的序列脱靶效率均为0;与野生型肺癌细胞株相比,用CRISPR/Cas9基因编辑技术修饰的肺癌细胞未检测到表达AIF蛋白,且筛选的杀死A549和NCI-H3255的嘌呤霉素浓度分别为0.60～0.80 μg/mL和0.60 μg/mL.结论 AIF在肺癌中表达上调.利用CRISPR/Cas9技术成功建立AIFM1基因敲除的肺癌细胞株,这将为研究AIF在肺癌发生发展机制提供合适的研究材料.

目的 探讨发汗解表法(越婢汤)与补肾固精法(固精方)治疗肾病综合征的疗效及可能机制.方法 40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、越婢汤组、固精方组,每组10只.除正常组外其余各组大鼠采用单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷9 mg/100 g建立肾小球足细胞损伤大鼠模型.造模后第2天开始越婢汤组每天灌胃给予含生药越婢汤2.1 g/100g,固精方组每天给予含生药固精方7.5 g/100g,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水,连续2周.检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮、尿酸、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯,尿蛋白定量和尿肌酐,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达,观察肾小球病理改变及足细胞超微结构.结果 与正常组比较,模型组大鼠尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯上升,血清白蛋白水平降低,尿蛋白肌酐比增加,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达均升高(P＜0.05).与模型组比较,越婢汤及固精方组血清尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、尿蛋白肌酐比下降,白蛋白上升,肾组织TRPC5、TRPC6 mRNA亦降低(P＜0.05).越婢汤组血清白蛋白、尿酸水平、肾组织TRPC5 mRNA表达低于固精方组,而TRPC6 mRNA高于固精方组(P＜0.05). 结论 越婢汤、固精方可能通过调控肾组织TRPC5及TRPC6表达,减轻足细胞损伤,从而改善肾病综合征的低蛋白、高血脂表现.

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度.方法:应用PAN(50 μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响.结果:①RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P＜0.05).含药血清作用24h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P＜0.01)和益气组(P＜0.05),而3组之间无显著差异(P＞0.05),益气组与对照组也无显著差异(P＞0.05).含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P＜0.05),且4组之间无明显差别(P＞0.05).②Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P＜0.05).含药血清作用24h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P＜0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P＞0.05),且4组间差异不明显(P＞0.05).各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P＜0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P＞0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P＞0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P =0.008 ＜0.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P＞0.05).结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同.

目的:通过观察雷帕霉素对PAN诱导的足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在雷帕霉素保护PAN诱导的足细胞损伤中的作用及可能机制.方法:构建PAN诱导的足细胞损伤模型,将足细胞分成对照组(Control组), PAN组(加入50 μg/ml PAN),雷帕霉素组(RAP组:分别加入100、200、300 ng/ml雷帕霉素),PAN+雷帕霉素组(PAN+RAP组:细胞在用含PAN的培养液培养前1 h,分别用100、200、300 ng/ml雷帕霉素进行预处理1 h).采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察自噬小体,Western blot检测LC3、p62、4EBP1、P70S6K、mTOR蛋白表达.结果:与对照组比较,PAN组足细胞凋亡增加,自噬体减少,LC3Ⅱ蛋白表达下调,p62上调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平上调;与PAN组比较, PAN+RAP组足细胞凋亡率下降,自噬体增加,LC3Ⅱ蛋白表达上调,p62下调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平下调.结论:PAN可以抑制足细胞自噬,促进足细胞凋亡;雷帕霉素可通过激活自噬改善PAN诱导的足细胞损伤,这种作用可能与雷帕霉素抑制mTOR/4EBP1、P70S6K信号通路有关.

目的:探讨SPE及其单体对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的损伤足细胞中Toll样受体4(TLR4)通路表达的影响.方法:足细胞与含有甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)、迷迭香酸(RA)、丹酚酸B(SalB)、RA+ SalB混合及他克莫司的完全培养液预先孵育30 min,再加入PAN(100 μg/ml)继续作用24h,观察足细胞骨架结构F-actin变化,western blot及半定量RT-PCR检测足细胞中TLR4、myd88、phosphor-NF-κB (pp65)在蛋白及mRNA水平的表达量变化.结果:(1)PAN作用24h后,足细胞骨架蛋白F-actin明显损伤,微丝解聚、胞体回缩,少数细胞尚存排列紊乱的丝状结构,而提前给予保护药物SPE、SalB、RA、SalB+ RA混合药物及他克莫司组的足细胞损伤明显减弱.(2)western blot数据显示,PAN诱导的损伤足细胞中TLR4、myd88及pp65蛋白的表达与正常组相比均有明显上调(P＜0.05);保护药物组:TLR4蛋白表达较模型组有明显下降(P＜0.05);MyD88蛋白表达除SalB高剂量组及SalB+ RA低剂量组较模型组无显著下降外,其余均能明显下调其表达量(P＜0.05);pp65在保护药物组中的表达均较模型对照组低(P＜0.05).(3)半定量RT-PCR结果显示,模型对照组中TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA表达量明显高于正常对照组;保护药物组中:TLR4 mRNA表达量在各药物处理组中均明显低于PAN组(P＜0.05),其中的SPE高、低剂量组,RA高、低剂量组,SalB+ RA高剂量组与正常组相接近(P＞0.05);MyD88 mRNA表达量在SPE及其单体处理后均有明显下调(P＜0.05);NF-κB mRNA表达量除SalB高剂量组中无明显下调外(P＞0.05),其余各保护药物组均下调(P＜0.05).结论:SPE及其活性单体对PAN诱导损伤足细胞的保护作用机制可能部分通过抑制TLR4信号相关蛋白表达来实现;甘西鼠尾草总酚酸提取物中的单体迷迭香酸对TLR4及其下游信号分子MyD88、NF-κB的抑制作用优于丹酚酸B和混合给药组.