目的:评价沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路在三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠80只，6～8周龄，体质量230～280 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(CIR组)、三叶苷＋脑缺血再灌注组(T组)和三叶苷＋脑缺血再灌注＋SIRT1/FoxO1信号通路抑制剂EX527组(E组)。采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。T组和E组大鼠于缺血前3 d时开始灌胃给予三叶苷15 mg/kg，2次/d，连续3 d；E组大鼠每次灌胃前腹腔注射EX527 5 mg/kg。于再灌注24 h时采用改良Longa评分评估神经功能，随后处死大鼠取全脑组织，采用TTC染色确定脑梗死体积，流式细胞术检测海马神经元凋亡率和ROS水平，Western blot法检测SIRT1及乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)表达，ELISA法检测SOD和MDA含量，HE染色后光镜下观察海马CA1区病理学结果。 结果:与S组比较，CIR组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平升高，SOD含量降低，SIRT1表达下调，Ac-FOXO1表达上调( P<0.05)；与CIR组比较，T组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平降低，SOD含量升高，SIRT1表达上调，Ac-FOXO1表达下调( P<0.05)；与T组比较，E组Longa评分、脑梗死体积、海马神经元凋亡率、ROS和MDA水平升高，SOD含量降低，SIRT1表达下调，Ac-FOXO1表达上调( P<0.05)。 结论:三叶苷可能通过激活SIRT1/FoxO1信号通路，抑制海马氧化应激反应和神经元凋亡，减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。

目的:探讨白藜芦醇（RES）对IL-1β诱导的软骨细胞的影响及其作用通路。方法:提取Wistar乳鼠软骨细胞，实验分为5组：对照组，IL-1β组，RES+IL-1β组，RES+IL-1β+EX-527[沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂]组，RES+IL-1β+AS[叉头框转录因子O1（FOXO1）抑制剂]组。采用实时荧光定量（qRT）-PCR检测SIRT1、FOXO1和MMP-3 mRNA表达量。免疫荧光技术检测软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白（Col-Ⅱ）的蛋白表达，蛋白质免疫印迹技术检测软骨细胞SIRT1，p-FOXO1/FOXO1的蛋白表达。ELISA检测软骨细胞炎性因子IL-6和TNF-α分泌量。计量资料多组间比较行单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t法。以 P<0.05差异具有统计学意义。 结果:与正常软骨细胞相比，IL-1β诱导的软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显降低，细胞TNF-α[（24.70±2.84）， t=19.24， P<0.001]和IL-6的分泌量[（3.35±0.28）， t=12.97， P<0.001]明显升高、MMP-3的mRNA表达[（2.46±0.23）， t=12.61， P<0.001]明显升高。RES作用于IL-1β诱导软骨细胞后，Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显升高（ P<0.001），细胞TNF-α[（12.60±1.05）， t= 10.14， P<0.001]和IL-6[（2.00±0.15）， t=9.89， P<0.001]的分泌量明显降低，MMP-3的mRNA表达[（1.30±0.14）， t=10.46， P<0.001]明显降低。加入SIRT1抑制剂EX-527或FOXO1抑制剂AS后，RES对IL-1β诱导软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达的促进作用明显降低（ P<0.05），对TNF-α和IL-6的分泌量抑制作用明显下降（ P<0.001），对MMP-3的mRNA表达抑制作用明显下降（ P<0.05）。 结论:RES通过SIRT1/FOXO1通路可明显改善IL-1β诱导的软骨细胞外基质降解和炎症反应。

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响.方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮).将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20 μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预).RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达.Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平.ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平.流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA 及蛋白表达和 GSH、FSH 水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA 及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe2+、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P＜0.05).与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe2+、T、LH水平降低.卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P＜0.05).结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡.

背景:膝骨关节炎是临床常见退行性关节疾病,主要表现为慢性炎症和氧化应激反应.白藜芦醇具有抗炎和抗氧化应激的生物作用,因此可对症进行治疗,有望为膝骨关节炎治疗提供新的策略.目的:探讨白藜芦醇通过沉默信息调节因子 1(silence information regulator 1,SIRT1)/叉头框转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FOXO1)通路对大鼠膝骨关节炎的作用机制.方法:40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组,每组10只,除对照组外均建立膝骨关节炎模型,分别在造模的第1,4,7天注射4%木瓜蛋白酶溶液与0.3 mol/L半胱氨酸溶液(1∶1 混置0.5 h)的混合液20 μL.造模成功后1 d开始给药,白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组大鼠经关节腔注射白藜芦醇25 mg/kg或100 mg/kg,对照组和模型组经关节腔注射等体积生理盐水.治疗28 d后,测定4组大鼠膝关节最大活动度;应用放射免疫法和ELISA法检测膝关节液中氧化应激指标和炎症因子水平;番红O-固绿染色分析膝关节中胶原纤维含量;采用Mankin组织学评分分析关节炎病变程度;蛋白质免疫印迹法检测膝关节SIRT1和FOXO1水平.结果与结论:①与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节最大屈伸角度明显增加,且高剂量组明显高于低剂量组(P<0.05);②与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节液中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平显著增加;而丙二醛水平显著下降,且高剂量组明显优于低剂量组(P<0.05);③与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节液炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显下降,且高剂量组明显低于低剂量组(P<0.05);④与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节胶原纤维含量增加,且高剂量组明显高于低剂量组(P<0.05);⑤与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节SIRT1表达水平显著增加,乙酰化FOXO1水平显著下调,且高剂量组变化幅度明显优于低剂量组(P<0.05);⑥提示白藜芦醇可显著改善膝骨关节炎大鼠关节液中的氧化应激和炎症因子水平,缓解关节炎症状,且呈剂量依赖性,可能是通过SIRT1/FOXO1通路实现的.

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制.方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg-1·d-1 阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg-1·d-1)VAP组、中剂量(200 mg·kg-1·d-1)VAP组和高剂量(300 mg·kg-1·d-1)VAP组,每组10只.除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg-1)复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周.双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca2+)、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子 1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平.结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05 或P<0.01).与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca2+、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca2+、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05 或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或 P<0.01).HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密.Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01).结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关.

目的 探究牡荆素对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤的保护作用及其调控机制.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、牡荆素(3、6、12 mg/kg),及牡荆素(12 mg/kg)+EX527(5 mg/kg)组,每组各 10 只.除对照组外,其余各组大鼠均采用卵清白蛋白诱导建立变应性鼻炎大鼠模型,模型构建成功后,各组大鼠ip相应剂量药物,对照组和模型组大鼠ip等量的生理盐水,1 次/d,连续14 d.末次给药结束后 30 min,记录各组大鼠行为学评分,观察鼻黏膜组织病理形态学变化;检测鼻黏膜组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧气簇(ROS)、铁离子(Fe2+)水平,铁死亡相关蛋白溶质载体家族 7 成员 11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(ACSL4)以及沉默信息调节因子 1(Sirt1)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、p-FoxO1、Ac-FoxO1 蛋白表达.结果 与模型组相比,牡荆素各剂量组大鼠行为学评分均显著降低,鼻黏膜损伤显著改善(P＜0.05);大鼠鼻黏膜组织匀浆SOD、GSH活性显著升高,MDA、ROS、Fe2+含量均显著降低(P＜0.05);大鼠鼻黏膜组织SLC7A11、GPX4、Sirt1、FoxO1 蛋白表达显著升高,p-FoxO1、Ac-FoxO1、ACSL4 蛋白表达显著降低(P＜0.05),且呈剂量相关性.结论 牡荆素能够改善变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤,其机制与激活鼻黏膜组织Sirt1/FoxO1 通路,抑制细胞铁死亡有关.

目的 探究白花丹素通过沉默信息调节因子 2 相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1 通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响.方法 120 只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527 组(sirt1 抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527 组,每组 20 只.检测大鼠 24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2 微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1 通路相关蛋白表达.结果 与对照组相比,DN组 24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1 蛋白均显著降低(P<0.05).与DN组相比,白花丹素低、高剂量组 24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6 水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1 蛋白显著升高(P<0.05);EX-527 组 24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6 水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1 蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527 可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用.结论 白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1 通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤.

缺血性脑卒中引起的脑缺血和再灌注可对神经组织造成无法弥补的损伤,影响神经功能的恢复.姜黄活性成分通过抑制小胶质细胞活性、抑制核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路、Janus蛋白酪氨酸激酶 2/转录激活子 3(janus protein tyrosine kinase 2/transcriptional activator 3,JAK2/STAT3)信号通路、激活磷脂酰肌醇三羟基激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(serine threonine kinase,Akt),发挥抗炎活性.姜黄活性成分可通过调节凋亡相关蛋白分泌,调节沉默信息调节因子 1(silentinformationregulator1,SIRT1)/叉头框蛋白 O1(forkhead box O1,FOXO1)信号通路,上调声波刺猬(sonic hedgehog,Shh)信号通路,阻止内质网应激相关凋亡途径,发挥抗细胞凋亡活性.姜黄活性成分可通过抗氧化应激反应,保护血脑屏障的完整性和功能,抑制过度自噬,保护星形胶质细胞,促进神经突触生长,发挥神经保护作用.

目的:本研究旨在探究川陈皮素(NOB)保护小鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)的可能分子机制.方法:将Balb/c小鼠分为5 组(n =6):假手术组、模型组、NOB组(50 mg/kg)、组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子 1(SIRT1)抑制剂EX527组(5 mg/kg)、NOB+EX527 组(50 mg/kg的NOB+5 mg/kg EX527).在建模前24h对小鼠进行药物处理.通过阻断小鼠左肾动静脉血流建立RIRI模型.建模24h后检测肾组织中氧化应激标志物含量.通过苏木精-伊红(HE)染色和天狼星红染色评价肾组织病变和纤维化.通过TUNEL染色检测肾细胞凋亡.通过蛋白质免疫印迹法检测肾组织中SIRT1、叉头框蛋白O3a(FOXO3a)、细胞凋亡和自噬相关蛋白表达.通过实时荧光定量PCR检测肾组织中SIRT1 和FOXO3a mRNA的水平.结果:与模型组比较,NOB组小鼠肾脏病变程度减轻,肾脏纤维化面积降低(均P＜0.05).与模型组比较,NOB组肾组织抗氧化作用升高(P＜0.05).与模型组比较,NOB组肾组织中细胞凋亡减少(P＜0.05).与模型组比较,NOB组肾组织中SIRT1 和FOXO3a的mRNA和蛋白相对表达量升高,微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,而p62 降低(均P＜0.05).此外,EX527 逆转了NOB对肾脏的保护作用(P＜0.05).结论:NOB通过激活SIRT-1/FOXO3a信号通路介导的自噬来减轻RIRI.

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937 细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子 1(SIRT1)/叉头框转录因子 O1(FoxO1)信号通路的影响.方法:体外培养 AML U937 细胞,取培养至对数生长期的U937 细胞分为对照组(常规培养 U937 细胞)、三氧化二砷组(在含 U937 细胞的培养基中加入 2 μmol/L 的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含 U937 细胞的培养基中加入 2 μmol/L 蓝萼甲素)、高(在含 U937 细胞的培养基中加入4 μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养 48h后.四甲基偶氮唑蓝法检测 U937 细胞增殖率,流式细胞术检测 U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察 U937 细胞自噬小体数量,荧光定量 PCR 法检测 U937 细胞 SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测 U937 细胞 SIRT1、FoxO1 蛋白表达水平.结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组 U937 细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组 U937 细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组 U937 细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05).结论:蓝萼甲素能抑制U937 细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活 SIRT1/FoxO1 信号通路有关.