目的:探讨芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、一氧化氮(NO)和细胞凋亡的影响及其机制.方法:60只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,复方丹参滴丸组(130 mg·kg-1),ZCF低、中、高剂量组(75,150,300 mg· kg-1).通过结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支30 min,再灌注3h建立缺血再灌注损伤模型,测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA),NO和一氧化氮合酶(NOS)等相关指标的变化.2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价心肌梗死程度,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA的表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量显著升高,SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性显著降低,心肌梗死程度严重,出现明显的细胞凋亡,显著下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达(P＜0.01).与模型组比较,ZCF给药组能明显降低大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量,提高SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性,同时可降低心肌梗死面积,改善缺血心肌的病理变化,抑制细胞凋亡,显著上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,提高Bcl-2/Bax水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:ZCF可减轻大鼠缺血心肌的损伤作用,其机制可能与减少氧自由基的产生,促进NO合成,上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达,抑制细胞凋亡有关.

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(ZCF)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法:采用体外培养HUVECs,分为正常组、模型组、芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和阳性药维生素C组.采用CCK-8法检测HUVECs活力,用试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性.采用流式细胞术检测活性氧(RoS)和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况.结果:与正常组比较,模型组细胞存活率、GSH含量和SOD活性明显降低,MDA、LDH和ROS含量明显增加,细胞凋亡率显著上升;与模型组比较,芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和维生素C组可显著提高细胞存活率和SOD活性,明显增加GSH含量、减少MDA和LDH含量,抑制ROS的生成,显著降低细胞凋亡率.结论:芳香新塔花总黄酮对H2O2诱导的HUVECs损伤具有保护作用,机制可能与其增强抗氧化能力、降低ROS产生和抑制细胞凋亡有关.

目的 观察芳香新塔花总黄酮(ZCF)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响及机制.方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型.以MTT法检测不同浓度芳香新塔花总黄酮对RAW264.7细胞的毒性作用.芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙(阳性药物)预处理,观察各组细胞的形态,以Griess法检测NO的含量,以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达.结果 1 μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞24h,可成功构建炎症细胞模型.芳香新塔花总黄酮在1～100 μg/mL浓度范围内对RAW264.7细胞无显著的细胞毒性.LPS刺激RAW264.7细胞后,细胞体积明显增大,形态不规则,伸出大量的伪足,而阿托伐他汀钙和芳香新塔花总黄酮干预后,RAW264.7细胞变小,触角减少,形态较规则.脂多糖可明显诱导RAW264.7细胞分泌NO、TNF-仪、IL-1β3和IL-6(P＜0.01),TLR4和NF-κB p65 mRNA表达增高,而芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙可使NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的释放受到抑制(P ＜0.05,P＜0.01).芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙预处理可使TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 芳香新塔花总黄酮可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,下调NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,其机制可能与其抑制TLR4/NF-κB信号转导通路的激活有关.

目的 探讨芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)通过调控miR-874-3p表达影响过氧化氢(H2 O2)诱导的神经细胞氧化损伤和凋亡.方法 采用流式细胞术检测不同浓度ZCF对H2 O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响.试剂盒检测LDH、MDA和SOD水平.实时定量PCR分析miR-874-3p表达量.转染miR-874-3p模拟物至SK-N-SH细胞,采用以上方法分析miR-874-3p过表达对H2 O2诱导的SK-N-SH细胞氧化损伤和凋亡的影响.结果 H2 O2诱导后SK-N-SH细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平显著升高,SOD活性、miR-874-3p表达量显著降低(P<0.05).ZCF显著抑制H2O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡、LDH释放,降低MDA水平,增加SOD活性以及miR-874-3p表达量(P<0.05).过表达miR-874-3p显著抑制H2 O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡、LDH释放,降低MDA水平,增加SOD活性(P<0.05).抑制miR-874-3p显著减弱ZCF对H2O2诱导的SK-N-SH细胞氧化损伤和凋亡的影响(P<0.05).结论 ZCF通过上调miR-874-3p表达可减轻H2 O2诱导的神经细胞氧化损伤和凋亡.

目的 建立芳香新塔花总黄酮的HPLC指纹图谱,为芳香新塔花总黄酮的质量评价提供参考.方法 通过HPLC法对15批不同时期采收的芳香新塔花中提取的芳香新塔花总黄酮进行色谱分析,对色谱结果进行相似度分析、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘法-判别分析,最终对15批芳香新塔花总黄酮的质量进行综合评价.结果 建立了芳香新塔花总黄酮的HPLC指纹图谱,确定了14个共有峰并指认了其中4个色谱峰.CPR分析结果表明15批样品综合质量高低依次为S9＞S15＞S4＞S5＞S14＞S10＞S11＞S12＞S2＞S13＞S3＞S6＞S8＞S1＞S7,包括蒙花苷和芦丁在内的5个成分是造成不同批次样品差异性的主要标志物.结论 所建立的HPLC指纹图谱方法稳定、准确性好,可用于芳香新塔花总黄酮的鉴定和质量评价.

目的:观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块及炎症反应的影响及其机制研究.方法:50只健康雄性ApoE-/-小鼠给予高脂饲料,以构建AS模型,随机分成5组并灌胃给药:模型对照组、阿托伐他汀3 mg/kg组、芳香新塔花总黄酮25、50、100 mg/kg组;10只同周龄同性别的健康C57BL/6J小鼠设为正常对照组给予普通饲料,灌胃给予等体积生理盐水.在第12 w末解剖小鼠,取出血清和主动脉血管,经苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠主动脉粥样硬化病变;油红0染色观察小鼠主动脉内壁斑块面积;全自动生化仪检测小鼠血清中血脂总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6含量;Western Blot检测主动脉Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白变化.结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P＜0.01);主动脉中TLR4、NF-κB蛋白表达明显上调(P＜0.05或P＜0.01);与模型对照组比较,芳香新塔花总黄酮50、100 mg/kg组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低,HDL-C含量显著升高,主动脉TLR4、NF-κB蛋白表达明显下调(P＜0.05或P＜0.01).芳香新塔花总黄酮各剂量组泡沫细胞浸润和内膜下组织斑块明显减少.结论:芳香新塔花总黄酮对ApoE-/-小鼠的AS具有较好的治疗作用,其机制与抑制炎症及TLR4/NF-κB通路有关.

观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠自噬和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,探讨芳香新塔花总黄酮抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制.ApoE-/-小鼠喂食高脂饲料8周,建立体内AS实验模型,随机分为5组(模型组、阳性对照组及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组),普通饲料喂食C57BL/6J小鼠设为空白组.灌胃给药12周后取出血清和主动脉,全自动生化分析仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管间黏附因子-1(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平;油红O染色法观察小鼠主动脉斑块面积;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉斑块及病理变化;免疫荧光法检测主动脉中P62、LC3的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠主动脉中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达.结果显示,与空白组相比,模型组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、MMP-9含量明显升高(P<0.01或P<0.05),HDL-C含量明显降低(P<0.05),主动脉内斑块面积显著增加(P<0.01),主动脉中LC3的表达量明显下调,P62的表达量明显上升(P<0.01或P<0.05),主动脉裂解液中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表达量明显下调,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62的表达明显上升(P<0.01);芳香新塔花总黄酮中、高剂量组较模型组显示均显著降低血清中TC、TG、LDL-C、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、MMP-9水平(P<0.01或P<0.05),增加HDL-C含量(P<0.01或P<0.05);主动脉斑块面积显著减小(P<0.01),且泡沫细胞的含量减少,管腔的狭窄程度减弱;芳香新塔花总黄酮各剂量组较模型组显示,明显增加主动脉中LC3和裂解液中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达量,降低主动脉中P62和裂解液中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62表达水平(P<0.01或P<0.05).结果表明,芳香新塔花总黄酮可改善血脂和炎症因子含量,减少主动脉组织中泡沫细胞和斑块的生成,其机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.