藏药解吉(()()),来源为龙胆科龙胆属Gentiana秦艽组(Sect.Cruciata)多种高山植物;可分为解吉那保(具蓝紫色花的)与解吉嘎保(具白色花的)两个品种.首次以解吉那保基原植物之一——长梗秦艽Gentiana waltonii Burk.与解吉嘎保基原植物之一——粗壮秦艽Gentiana robusta King ex Hook.f为模式植物,分别构建其根、茎、叶、花转录组数据库.对原始数据进行除杂,将质控后得到的所有高质量序列进行de novo拼接,分别得到长梗秦艽79 455条、粗壮秦艽78 466条unigene,平均长度分别为834 bp和862 bp.根据GO功能分类,可将unigene分为3大类65分支;根据KOG功能可将unigene分为25类;KEGG代谢通路分析分别发现长梗秦艽和粗壮秦艽中315条、340条unigene参与到20个次生代谢标准通路中.环烯醚萜苷类为藏药解吉及中药秦艽类、龙胆类、当药及青叶胆等药材的指标性成分及活性成分之一,分析结果显示:分别有80条、57条unigene参与编码环烯醚萜苷类合成途径中的24个关键酶,且在不同部位中的表达存在差异;还发现多个SSR和SNP、InDel位点.本工作可为藏药材基原植物遗传图谱构建,分子标记开发,功能基因掌握,有效成分累积规律、道地性形成机制、藏药材品种科学内涵的探讨,分子育种及濒危藏药高山植物就地保护等提供基础科学资料.

运动神经元病的基本病机在于本虚标实,以肝脾肾三脏虚损为本,常以风动为标.风邪在痿证发生中起重要作用,其性主动、易袭阳位的致病特点与运动神经元病临床特征具有一致性.基于风邪致痿理论,运动神经元病治疗中配伍风药可选用黄芪、肉桂、巴戟天助源温息肝风,柴胡、升麻、荷叶升发清阳举陷,牛膝、秦艽、桑寄生活血养血舒筋,钩藤、天麻疏肝解郁散火,桂枝、姜黄、全蝎、地龙、穿山甲辛散搜风通络,蝉蜕、桔梗、威灵仙上行利窍启闭,同时可达到助补不致滋腻、双向通调肠腑之功.不同风药均有其个性专长,善用之可获奇效.

藏药"解吉"为多来源品种之一,基原涉及龙胆科龙胆属(Gentiana)秦艽组(Sect.Cruciata)长梗秦艽Gentiana waltonii Burk.及全萼秦艽Gentiana lhassica Burk.等多种植物.在课题组前期民族植物学考察及品种整理基础上,本文首次分别测定两种基原植物的叶绿体全基因组序列,进而基于我国青藏高原产秦艽组10个物种的叶绿体全基因组数据筛选物种鉴定DNA分子标记,结果如下:①长梗秦艽叶绿体全基因组长度为148705 bp,大单拷贝区(LSC)、小单拷贝区(SSC)分别为81068 bp和17029 bp,反向重复区(IR)为25304 bp;②全萼秦艽全基因组长度为148652 bp,大单拷贝区(LSC)、小单拷贝区(SSC)分别为80997 bp和17051 bp,反向重复区(IR)为25302 bp;⑨分别注释叶绿体基因112个,其中78个编码蛋白基因(CDS:coding sequence)、30个tRNA基因、4个rRNA基因以及2个假基因(pseudogene:φrps 16,ΨinfA);④构建的特异性引物PCR两步鉴定法可在秦艽组内将长梗秦艽、全萼秦艽有效鉴别.本工作可为长梗秦艽及全萼秦艽物种DNA分子鉴定、藏药"解吉"品质评价、高山濒危物种种质资源保护及龙胆科龙胆属系统发育分析等工作提供基础科学资料.

[目的]探讨长梗秦艽酮、微小RNA(miR)-495-3p质粒对肾癌细胞增殖、侵袭、凋亡及顺铂敏感性的影响及协同作用.[方法](1)体外研究:将人肾癌caki-1细胞分为空白组(未处理),长梗秦艽酮低、中、高剂量组,miR阴性对照(miR-NC)组和miR-495-3p组(转染组)等6组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度顺铂处理的caki-1细胞活力、半数抑制浓度(IC50),膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)法测定caki-1细胞凋亡情况,Transwell实验测定caki-1细胞侵袭能力,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-495-3p和X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达.(2)体内研究:构建高度免疫缺陷NSG小鼠肾癌移植瘤模型.将40只NSG小鼠分为阴性组(腋部皮下注射转染miR-NC质粒的肾癌caki-1细胞)、转染组(腋部皮下注射转染miR-495-3p质粒的肾癌caki-1细胞)、药物组(腋部皮下注射肾癌caki-1细胞,灌胃长梗秦艽酮)和联合组(腋部皮下注射转染miR-495-3p质粒的肾癌caki-1细胞,灌胃长梗秦艽酮),检测并比较各组小鼠的肿瘤质量和体积.[结果](1)与空白组比较,长梗秦艽酮低、中、高剂量组caki-1细胞活力及对顺铂的IC50值均显著降低,凋亡率显著增加,细胞侵袭能力显著降低,miR-495-3p表达水平升高,XIAP mRNA表达水平显著降低(均P<0.05);与miR-NC组比较,miR-495-3p组caki-1细胞活力、对顺铂的IC50值均显著降低,凋亡率显著增加,细胞侵袭能力显著降低,miR-495-3p表达水平升高,XIAP mRNA表达水平显著降低(均P<0.05);长梗秦艽酮高剂量组与miR-495-3p组上述各指标水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)与阴性组比较,转染组、药物组和联合组小鼠肿瘤质量和肿瘤体积均显著减小(P<0.05);联合组小鼠肿瘤质量和肿瘤体积均小于转染组和药物组(P<0.05);转染组小鼠肿瘤质量和肿瘤体积与药物组比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]长梗秦艽酮、miR-495-3p质粒可靶向抑制XIAP降低肾癌细胞生物活性,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭,增加细胞的顺铂敏感性,且二者有一定的协同作用.