目的 观察P3肽对RAW264.7巨噬细胞脂质沉积的影响,并探讨其作用机制.方法 采用MTT法筛选P3肽及氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的作用浓度,并用80 mg·L-1的ox-LDL诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞;分别采用油红D染色和总胆固醇含量测定试剂盒,检测细胞内脂质沉积及总胆固醇含量;实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及 Western blot检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的 mRNA 和蛋白表达变化;分别应用肝X受体(liver X receptor,LXR)的激动剂TO901317、GW3965,以及LXR抑制剂GSK2033进一步验证P3肽调控ABCA1、ABCG1表达的作用机制.结果 P3肽明显减少RAW264.7细胞内脂质沉积,降低细胞内总胆固醇含量,上调ABCA1、ABCG1mRNA和蛋白表达;P3肽上调AB-CA1、ABCG1 的作用与 LXR 激动剂 T0901317、GW3965 相似;加入抑制LXR基因转录的抑制剂GSK2033后,P3肽对ABCA1、ABCG1的基因表达无上调作用.结论 P3肽可减少RAW264.7巨噬细胞内脂质积聚,抑制泡沫细胞的形成,其作用机制可能与激活LXR-ABCA1/ABCG1通路有关.

目的 研究肝X受体激活对全脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)小鼠的海马神经干细胞增殖及认知功能的影响,及其作用机制.方法 将75只C57BL/6小鼠随机分为3组,即假手术组(Sham)、全脑缺血/再灌注组(I/R)、全脑缺血/再灌注+肝X受体激动剂TO901317干预组(L/R+TO90),每组25只.采用双侧颈总动脉夹闭方法建立全脑I/R小鼠模型;肝X受体激动剂TO901317 (30 mg·kg-1)在缺血后24 h腹腔注射(i.p,1次/天,连续14 d).Morris水迷宫实验测定小鼠学习与记忆等认知功能的改变;HE染色观察小鼠海马CA1区病理形态学的改变;免疫组化观察小鼠海马齿状回区DCX阳性细胞的表达;免疫荧光观察海马齿状回区BrdU阳性细胞的表达;Western blot检测海马LXRα、LXRβ、ABCA1、p-ERKl/2、t-ERK1/2、p-CREB、t-CREB、BDNF等蛋白的表达情况.结果 LXR激动剂TO901317处理后,I/R小鼠的海马齿状回DCX与BrdU阳性细胞的表达数目均增加(P＜0.01),认知功能得到了改善(P＜0.01),同时,海马ABCA1、p-ERK1/2、p-CREB、BDNF等蛋白表达水平也上调(P＜0.01).结论 肝X受体的激活促进了I/R小鼠海马齿状回颗粒下层神经干细胞的增殖和认知功能的改善,其机制可能与激活ERK1/2-CREB-BDNF信号通路,促进I/R小鼠海马DG区内源性神经发生有关.

目的 探讨肝X受体激动剂TO901317对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜的保护作用.方法 取24只健康SPF级SD大鼠,随机分为正常组、模型组、TO901317组,每组各8只.正常组大鼠不做任何处理;模型组、TO901317组大鼠在禁食24 h后测量空腹血糖浓度,腹腔内注射链脲佐菌素60 mg·kg-1,1周后采尾静脉血检测空腹血糖浓度.此后每月检测空腹血糖浓度1次,以空腹血糖浓度持续24周高于16.7 mmol·L-1作为造模成功的标准;TO901317组大鼠在第25周时一次性双眼玻璃体内注射5μL TO901317(3.125 g·L-1),正常组、模型组大鼠此阶段不做任何处理.造模成功后取各组大鼠视网膜组织行HE染色,观察各组大鼠视网膜形态结构和微血管变化情况,测量各组大鼠视网膜厚度.ELISA法检测大鼠视网膜白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量,实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜ABCA1、IL-1β、IL-6、VEGF的mRNA相对表达量,Western blot检测大鼠视网膜ABCA1、VEGF、IL-1β、IL-6蛋白表达水平.结果 正常组大鼠视网膜各层组织间连接紧密,细胞排列整齐,各细胞形态及微血管结构正常.模型组和TO901317组大鼠视网膜可见内界膜肿胀断裂严重,部分内皮细胞突出内界膜;两组大鼠视网膜厚度均较正常组明显增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);TO901317组大鼠视网膜各层结构改变介于正常组与模型组之间,视网膜厚度较模型组明显减小,差异有统计学意义(P<0.05).与正常组相比,模型组大鼠视网膜IL-1β和IL-6含量均明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);TO901317组大鼠视网膜IL-1β和IL-6含量较模型组均明显下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05).模型组大鼠视网膜ABCA1 mRNA相对表达量较正常组和TO901317组均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);模型组大鼠视网膜IL-1β、IL-6、VEGF的mRNA相对表达量较正常组和TO901317组均显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).模型组大鼠视网膜ABCA1蛋白相对表达量较正常组和TO901317组均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);模型组大鼠视网膜IL-1β、IL-6和VEGF蛋白相对表达量较正常组和TO901317组均显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 肝X受体激动剂TO901317可以上调ABCA1表达,下调IL-1β、IL-6和VEGF表达,抑制DR大鼠视网膜炎症反应和新生血管形成,对DR大鼠视网膜有一定的保护作用.

目的 观察肝脏X受体(LXR)激动剂TO901317对N2a/APP695swe细胞内β-淀粉样蛋白42(Aβ42)生成的影响,并探索其潜在机制.方法 体外培养N2a/APP695swe细胞,并用不同浓度的TO901317(5、10和20μmol/L)作用于细胞,采用ELISA检测细胞上清液中生成的Aβ42水平变化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测N2a/APP695swe细胞内淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)和小凹蛋白-1(caveolin-1)mRNA和蛋白水平的表达.结果 ELSIA结果显示,TO901317明显降低了细胞上清液中生成的Aβ42水平(P<0.01),且呈浓度依赖性.RT-PCR和Western blot结果显示,TO901317明显抑制了APP和BACE1 mRNA及蛋白水平表达(P<0.01),促进了caveolin-1 mRNA和蛋白水平表达(P<0.01).结论 TO901317能明显抑制N2a/APP695swe细胞内Aβ42的生成,其机制可能与TO901317促进caveolin-1的表达,抑制APP和BACE1的表达有关.

目的:肝脏X受体(liver X receptor,LXR)是核受体超家族中的一员,其中LXR-β是脑细胞内胆固醇含量的重要感受器,而LXR-β/类视黄醇X受体(retinoic X receptor,RXR)-α/ATP结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)胆固醇跨膜转运体系与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生、发展密切相关.LXR激动剂TO901317能影响APP/PS1双转基因小鼠脑组织中β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的生成,但其具体机制尚未阐明.本研究旨在观察LXR激动剂TO901317对高胆固醇饲料饲喂的AD小鼠的认知功能的影响,并从胆固醇代谢的角度探讨其可能的机制.方法:选取24只雄性6月龄APP/PS1双转基因AD小鼠,并随机分为4组,即普通饲料(control)组、高胆固醇饮食(cholesterol rich diet,CRD)组、CRD联合LXR激动剂TO901317饲喂组(TO901317组)以及CRD、TO901317联合LXR拮抗剂GSK2033饲喂组(GSK2033组),每组各6只.以CRD为基础饲料混合猪油、蛋黄粉、鱼肝油等加工制成的颗粒饲料,按每天两次饲喂小鼠;药物组在CRD的同时给予药物,TO901317及GSK2033溶解后均稀释至最终浓度0.03％,并按照小鼠体重通过胃管每日灌胃给药,各组总治疗时间为3个月.饲喂3个月后,采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠空间探索和记忆能力的变化;酶标仪比色法检测各组小鼠血清中TC、LDL和HDL的含量;ELISA法检测各组AD小鼠脑组织中Aβ42的表达情况;蛋白质印迹法检测各组小鼠脑组织LXR-β、RXR-α、ABCA1和Caveolin-1蛋白质水平的变化.结果:Morris水迷宫实验结果显示:与control组相比,CRD组小鼠穿越平台的次数、距离和时间均显著降低(均P<0.05);相较于CRD组,TO901317组小鼠穿越平台的次数、距离和时间显著增加(均P<0.05);而相较于TO901317组,GSK2033组上述指标均降低(均P<0.05).酶标比色仪检测结果显示:CRD组小鼠血清中TC和LDL含量较control组显著增加,而HDL却显著减少(均P<0.001);TO901317组中TC和LDL含量较CRD组减少,HDL含量增加(均P<0.001);GSK2033组小鼠血清中TC和LDL含量较TO901317组却显著增加,HDL含量显著减少(均P<0.001).ELISA结果显示:4组中CRD组小鼠脑内的Aβ42生成量最多;与CRD组比较,TO901317组小鼠脑内的Aβ42量显著减少(P<0.001),4组中含量最低;control组与GSK2033组含量接近.蛋白质印迹法结果显示:CRD组中LXR-β、RXR-α、ABCA1蛋白质水平较control组显著降低,Caveolin-1蛋白质水平却明显升高(均P<0.01).而经TO901317处理后,AD小鼠脑组织中LXR-β、RXR-α、ABCA1蛋白质水平明显升高,Caveolin-1蛋白质水平降低(均P<0.001);在GSK2033组中,TO901317对AD小鼠的影响被GSK2033部分逆转,相较于TO901317组,小鼠脑内的LXR-β、RXR-α、ABCA1蛋白质水平降低,Caveolin-1蛋白质水平升高(均P<0.05).结论:CRD导致转基因AD小鼠产生更加严重的空间探索障碍和学习记忆能力障碍,而LXR激动剂TO901317减轻了这一效应.其机制可能为TO901317通过激活LXR-β/RXR-α/ABCA1跨膜转运体系促进胆固醇外排,降低Caveolin-1的表达并改善脂筏的构成,最终降低脑内Aβ42的生成.