目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人类组织相容性白细胞抗原复合物P5(HCP5)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经细胞损伤的影响，并分析其潜在机制。方法:将SH-SY5Y细胞分为对照组(CON组，正常培养基培养)、模型组(Model组，进行OGD/R)、干扰对照组[si-NC组，转染HCP5小分子干扰RNA阴性对照(si-NC)后进行OGD/R)]、HCP5干扰组[si-HCP5组，转染HCP5小分子干扰RNA(si-HCP5)后进行OGD/R]、HCP5干扰+抑制剂对照组[si-HCP5+anti-NC组，转染si-HCP5、miR-525-5p抑制剂阴性对照(anti-NC)后进行OGD/R]、HCP5干扰+miR-525-5p抑制剂组[si-HCP5+anti-miR-525-5p组，转染si-HCP5、miR-525-5p抑制剂后进行OGD/R]。qRT-PCR检测细胞中lncRNA HCP5、miR-525-5p的表达；MTT检测SH-SY5Y细胞活性；二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平；流式细胞术检测SH-SY5Y细胞凋亡；Western blot检测细胞中BTG2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白的表达。SPSS 25.0软件用于分析数据，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK- q检验。 结果:6组细胞中lncRNA HCP5、miR-525-5p的RNA水平和BTG2蛋白的表达水平均差异有统计学意义( F＝28.853，59.241，13.731，均 P<0.001)。Model组lncRNA HCP5水平高于CON组，miR-525-5p水平低于CON组，BTG2蛋白水平高于CON组(均 P<0.05)；si-HCP5组lncRNA HCP5水平低于Model组，miR-525-5p水平高于Model组，BTG2蛋白水平低于Model组(均 P<0.05)；si-HCP5+anti-miR-525-5p组lncRNA HCP5水平高于si-HCP5+anti-NC组，miR-525-5p水平低于si-HCP5+anti-NC组，BTG2蛋白水平高于si-HCP5+anti-NC组(均 P<0.05)。6组细胞的细胞活性和ROS水平均差异有统计学意义( F＝16.180，59.950，均 P<0.001)。Model组的细胞活性低于CON组(0.33±0.12，0.63±0.11)，ROS水平高于CON组(224.62±23.27，100.00±0.00)( P<0.05)；si-HCP5+anti-miR-525-5p组细胞活性低于si-HCP5+anti-NC组(0.38±0.08，0.58±0.08)( P<0.05)，ROS水平高于si-HCP5+anti-NC组(207.83±19.39，135.27±14.36)( P<0.05)。6组细胞的凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3的表达水平均差异有统计学意义( F＝27.994，29.660，45.000，52.983，均 P<0.001)。与si-NC组比较、si-HCP5组与si-HCP5+anti-NC组比较，Model组SH-SY5Y细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白水平和凋亡率均差异无统计学意义(均 P>0.05)；与CON组相比，Model组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著上调(均 P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著下调( P<0.05)；与Model组、si-NC组相比，si-HCP5组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下调(均 P<0.05)，Bcl-2蛋白水平上调( P<0.05)；与si-HCP5组、si-HCP5+anti-NC组相比，si-HCP5+anti-miR-525-5p组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著上调(均 P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著下调( P<0.05)。 结论:lncRNA HCP5可能通过靶向上调miR-525-5p来抑制BTG2表达，从而导致OGD/R模型中神经细胞发生凋亡。

目的:探讨妊娠期高血压疾病(HDP)患者血清circACTR2、miR-525-5p水平与不良妊娠结局的相关性.方法:选取2020年1月—2022年6月在本院建档并定期产前检查的HDP患者148例为HDP组,产前检查正常并分娩的100例孕妇作为对照组,收集临床资料,根据是否发生不良妊娠结局将HDP患者分为正常妊娠结局组98例、不良妊娠结局组50例.采用实时荧光定量PCR法检测孕妇血清circACTR2和miR-525-5p表达水平;分析HDP患者妊娠结局与临床病理特征关系;采用Spearman法分析HDP患者血清circACTR2和miR-525-5p表达与不良妊娠结局的相关性;采用logisitic回归分析HDP患者不良妊娠结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析HDP患者血清circACTR2、miR-525-5p表达预测不良妊娠结局价值.结果:HDP组血清circACTR2(1.33±0.35)高于对照组(1.08±0.27),miR-525-5p(0.76±0.21)低于对照组(1.02±0.30)(P＜0.05);HDP不良妊娠结局患者血清胱抑素C(CysC)、D-二聚体(D-D)、C反应蛋白(CRP)和circACTR2水平高于HDP正常妊娠结局患者,miR-525-5p水平低于HDP正常妊娠结局患者(P＜0.05);血清circACTR2水平与不良妊娠结局呈正相关,血清miR-525-5p水平与不良妊娠结局呈负相关(均P＜0.05);CysC、D-D、CRP、circACTR2和miR-525-5p异常均为HDP患者不良妊娠结局的影响因素(P＜0.05);circACTR2联合miR-525-5p预测HDP患者不良妊娠结局的曲线下面积为0.877,敏感度76.0％,特异度86.7％.结论:HDP患者血清circACTR2表达上调,miR-525-5p表达下调,二者与HDP不良妊娠结局密切相关,二者联合检测对预测HDP患者不良妊娠结局有较好效能.

目的 筛选乳腺癌放射治疗(放疗)抵抗相关微小RNA(miRNAs),为乳腺癌患者放疗抵抗的基础研究与临床应用研究提供实验基础.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中下载乳腺癌放疗患者相关miRNAs微阵列数据集GSE 107743,利用GEO2R分析工具筛选放疗后局部复发患者的差异表达miRNAs,mirDIP数据库预测差异表达miRNAs的靶基因,DAVID数据库对靶基因分别进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.最后采用实时荧光定量PCR在人乳腺癌细胞MCF-7中进行差异表达验证.结果 采用GEO2R分析工具筛选出9种与放疗抵抗相关的差异表达miRNAs,其中3种miRNAs(hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591)表达上调,6种miRNAs(hsa-miR-488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h、hsa-miR-488-3p、hsa-miR-744-3p、hsa-miR-103b)表达下调.靶基因预测结果显示,9种差异表达miRNAs的潜在靶基因共134个.靶基因显著富集在细胞周期、细胞凋亡、干细胞分化等相关生物学过程(均P＜0.05)以及转化生长因子-β、磷脂酰肌醇3-激酶\蛋白激酶B信号通路等信号通路中(均P＜0.05).实时荧光定量PCR检测结果表明,6种miRNAs (hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591、hsa-miR488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h)在经5 Gy 137Csγ射线辐照后的MCF-7细胞中表达差异改变与GEO2R分析结果完全一致.结论 利用生物信息学从乳腺癌放疗患者局部复发临床样本中筛选出的差异表达miRNAs可能与乳腺癌患者的放疗抵抗密切相关,有望成为放疗抵抗治疗的新靶点.

目的 探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(TUG1)对缺氧复氧心肌细胞焦亡、自噬的影响及调控机制.方法 建立缺氧复氧大鼠心肌细胞H9c2损伤模型;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测TUG1、miR-525-5p、NOD样受体家族CARD结构域包含分子5(NLRC5)在细胞中的表达;用脂质体分别转染pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-525-5p mimics、anti-miR-525-5p、pcDNA-NLRC5、si-NLRC5至H/R H9c2细胞;或共转染pcDNA-TUG1和miR-525-5p mimics、miR-525-5p mimics和pcDNA-NLRC5至H/RH9c2细胞;双荧光素酶报告基因检测细胞的荧光活性.流式细胞术检测细胞焦亡率;Western blot检测细胞自噬标志基因自噬相关基因(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(LC3),焦亡相关基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase-1)的蛋白表达.结果 与H9c2细胞相比,H/R H9c2细胞中TUG1、NLRC5表达显著升高,miR-525-5p表达显著降低(P＜0.05).TUG1能够靶向miR-525-5p,miR-525-5p又可靶向NLRC5.过表达TUG1可明显增强H/R对H9c2细胞的焦亡诱导和自噬抑制作用,并上调NLRP3、caspase-1,下调Beclin1、LC3.回复miR-525-5p能够部分逆转TUG1对H/R H9c2细胞的调控,回复NLRC5也可部分逆转miR-525-5p对H/R H9c2细胞的调控作用.结论 LncRNA TUG1促进缺氧复氧心肌细胞焦亡,抑制自噬的机制与靶向miR-525-5p/NLRC5通路相关.

目的:探讨长链非编码RNA LINC00963是否通过靶向miR-525-5p调控LPS诱导的牙周膜细胞损伤.方法:分离培养牙周膜细胞,分别转染si-LINC00963、miR-525-5p和anti-miR-525-5p,用LPS处理形成炎性损伤细胞模型.采用RT-qPCR、ELISA、流式细胞术、Western blot检测牙周膜细胞中LINC00963、miR-525-5p表达、炎症因子TNF-α、IL-1β水平、细胞凋亡率.双荧光素酶报告实验分析LINC00963对miR-525-5p的靶向调控.结果:转染si-LINC00963或miR-525-5p过表达降低了LPS诱导的牙周膜细胞中TNF-α、IL-1β水平、凋亡率、Bax蛋白水平,提高了Bcl-2蛋白水平(P<0.05).LINC00963靶向调控miR-525-5p的表达.下调miR-525-5p表达逆转了si-LINC00963表达对LPS诱导的牙周膜细胞损伤的作用.结论:干扰LINC00963通过靶向miR-525-5p,抑制LPS诱导的牙周膜细胞凋亡和炎症因子表达.

目的:探讨miRNA调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖的潜在机制.方法:纳入2019年06月至2020年06月在我院接受治疗的食管癌患者6例,采集其食管癌组织和癌旁组织后抽取总RNA进行miRNA高通量测序.在食管癌细胞CaES-17中过表达食管癌组织和癌旁组织中的差异miRNA,检测食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖情况.通过TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验分析miRNA的靶标mRNA.结果:6例患者的食管癌组织和癌旁组织通过高通量测序发现hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-6818-5p、hsa-miR-525-5p、hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-212-5p、hsa-miR-586、hsa-miR-1286、hsa-miR-365b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-4317在食管癌组织和癌旁组织中的表达差异在8倍以上,并且食管癌组织均高于癌旁组织.干扰上述miRNA后,发现干扰miR-586能够抑制食管癌细胞CaES-17的增殖水平和迁移水平,提高凋亡水平.过表达miR-586后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升.TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验发现miR-586靶向TLR7的3'端非编码区.敲低TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升.过表达TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平上升,增殖水平和迁移水平下降.但是,同时干扰miR-586和敲低TLR7后,相比于对照食管癌细胞,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平和增殖水平无显著差异.结论:miR-586通过靶向TLR7的3'端非编码区,降解了 TLR7的mRNA,抑制了 TLR7的蛋白翻译,最终抑制了食管癌细胞CaES-17的凋亡、促进了食管癌细胞CaES-17的增殖.

目的 探讨微小RNA-525-5p(miR-525-5p)对乳腺癌细胞辐射照射敏感性的影响及机制.方法 该研究起止时间为2019年6月至2020年6月,人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞MCF-10A均购自美国菌种保藏中心.运用qRT-PCR法检测人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞MCF-10A中miR-525-5p的mRNA的表达;将miR-525-5p模拟物(miR-525-5p mimics)阴性对照(miR-NC)组(转染miR-NC)、miR-525-5p组(转染miR-525-5p mim-ics)、RECQL5小干扰RNA阴性对照(si-NC)组(转染si-NC)、RECQL5小干扰RNA(si-RECQL5)组(转染si-RECQL5)、miR-525-5p+RECQL5过表达空载体(pcDNA)组(共转染miR-525-5p mimics和pcDNA)、miR-525-5p+RECQL5过表达载体(pcDNA-REC-QL5)组(共转染miR-525-5p mimics和pcDNA-RECQL5),均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;Western blotting检测细胞中RECQ样蛋白5(RECQL5)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;克隆形成实验检测细胞的存活分数.结果 与非恶性乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7、BT474中miR-525-5p表达[0.28±0.02,0.33±0.02,0.42±0.03比1.01±0.08]显著降低,RECQL5 mRNA和蛋白表达[1.68±0.15,1.58±0.12,1.48±0.11比1.00±0.08;1.43±0.11,1.38±0.12,1.53±0.14比0.99±0.07]显著升高(P<0.05).过表达miR-525-5p或敲减RECQL5均可促进乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡,增强对辐射照射的敏感性.miR-525-5p可抑制野生型RECQL5细胞的荧光活性,并负向调控RECQL5的表达.过表达RECQL5可逆转miR-525-5p对乳腺癌细胞的凋亡促进及辐照增敏作用.结论 miR-525-5p可促进乳腺癌细胞凋亡,增强对辐射照射的敏感性,其机制与靶向RECQL5有关,将可为乳腺癌的放射治疗提供新方向.

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP1-261G23.7对人胶质瘤细胞增殖及迁移的影响及可能的调控机制.方法:采用GEPIA数据库分析RP1-261G23.7在胶质瘤组织中的相对表达.采用qRT-PCR检测RP1-261G23.7在4种胶质瘤细胞系(U87MG、SNB-19、U251、LN382)中的相对表达.采用LipofectamineTM 3000向胶质瘤细胞U87MG中单独转染si-RP1-261G23.7质粒(si-RP1-261G23.7组)和si-NC对照质粒(si-NC组).采用CCK-8实验和细胞划痕实验检测转染后U87MG细胞的增殖及迁移能力.采用生物信息学、qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验研究RP1-261G23.7和miR-525-5p表达的关系.Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白的表达.结果:与正常组织相比,RP1-261G23.7在胶质瘤组织中表达上调(P<0.01).与人脑星型胶质正常细胞系(HEB)相比,RP1-261G23.7在四种胶质瘤细胞系中表达均上调(P<0.01),U87MG细胞中RP1-261G23.7相对表达量最高(P<0.01).与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7显著抑制了U87MG细胞的增殖(P<0.05)和划痕愈合(P<0.01).RP1-261G23.7能够直接互补结合miR-525-5p(P<0.01).与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7表达显著促进了U87MG细胞中miR-525-5p的表达(P<0.01),NF-κB信号通路蛋白表达显著下降(P<0.01).结论:胶质瘤组织和细胞系中RP1-261G23.7表达明显上调,敲减RP1-261G23.7通过促进miR-525-5p表达、干扰NF-κB信号通路活化,抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖和迁移,可能为胶质瘤的靶向治疗开辟新的路径.

目的 探讨lncRNA SNHG17对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制.方法 qRT-PCR检测正常胎盘组织、子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17和miR-525-5p表达.体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分别转染si-SNHG17、anti-miR-525-5p及其阴性对照;采用平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-525-5p与SNHG17的靶向关系.结果 与正常胎盘组织比较,子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17表达升高,miR-525-5p表达降低(P<0.05).转染si-SNHG17后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多,划痕愈合率升高(P<0.05).lncRNA SNHG17靶向调控miR-525-5p;共转染si-SNHG17和anti-miR-525-5p后细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05).结论 沉默lncRNA SNHG17可通过促进miR-525-5p表达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移及侵袭.