目的 探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制.方法 利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsa-miR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC50实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平.结果 生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p.CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因.与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05).靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05).结论 CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移.

目的 阐明长基因间非蛋白质编码RNA 1270(LINC01270)在肺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的分子作用.方法 经实时荧光定量PCR(qPCR)检测肺癌组织的LINC01270 和微小RNA-770-5p(miR-770-5p)及肺癌细胞的LINC01270 水平.转染LINC01270 干扰序列siRNA-LINC01270 或空白质粒siRNA-NC至A549 细胞并分为 3 组:空白对照组、阴性对照组和LINC01270 干扰组;MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力变化情况,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、N-钙黏蛋白(N-cad)和E-钙黏蛋白(E-cad)水平.双荧光素酶报告系统验证LINC01270 与miR-770-5p的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,肺癌组织的LINC01270 水平升高而miR-770-5p水平降低(P＜0.05),且肺癌组织中LINC01270 水平与miR-770-5p水平呈负相关性(r=-0.716,P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验显示LINC01270 通过直接结合与miR-770-5p靶向作用并负调节miR-770-5p的表达.肺癌细胞H1299、SPC-A-1、SK-MES-1、H1650和A549 的LINC01270 水平分别为 1.403±0.057、1.474±0.059、1.603±0.067、1.725±0.060 和 1.940±0.058,高于 16HBE细胞的 1.000±0.066(P＜0.05).LINC01270 干扰组A549 细胞 48、72 h的细胞活力较阴性对照组减弱,划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(21.537±2.205)%和(71.000±6.429)个,少于阴性对照组的(47.767±3.180)%和(284.667±7.623)个,且MMP-9、N-cad和E-cad水平低于阴性对照组,上述差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 LINC01270 促进NSCLC的增殖、迁移和侵袭,至少部分通过负性调节miR-770-5p表达,在肺癌中发挥促癌功效.

目的 探讨蓬子菜总黄酮(FGVL)对高糖诱导足细胞损伤的影响及其可能作用机制.方法 采用高糖诱导小鼠足细胞建立细胞损伤模型,不同浓度的FGVL处理足细胞,用脂质体转染法将pcDNA、pcDNA-TPTEP1 转染至足细胞后用25 mmol/L葡萄糖处理24 h,用脂质体转染法将si-NC、si-TPTEP1 转染至足细胞后用200 μg/ml FGVL与25 mmol/L葡萄糖处理24 h;用试剂盒检测丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TPTEP1、miR-770-5p的水平;双荧光素酶报告实验验证TPTEP1 与 miR-770-5p的靶向关系;Western印迹检测肾病蛋白(nephrin)、足突蛋白(podocin)、突触极蛋白(synaptopodin)、酶切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达量.结果 FGVL可明显降低高糖诱导的足细胞中miR-770-5p表达量和MDA水平(P<0.05),并可明显降低细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白水平(P<0.05),而细胞存活率和SOD、CAT活性明显升高(P<0.05),TPTEP1 表达量和nephrin、podocin、synap-topodin蛋白表达明显升高(P<0.05);TPTEP1 可靶向调控miR-770-5p表达;转染pcDNA-TPTEP1 后高糖诱导的足细胞中miR-770-5p表达量和MDA的水平明显降低,细胞凋亡率明显下降,Cleaved Caspase-3 及Cleaved Caspase-9 蛋白表达明显下降,细胞存活率和SOD、CAT活性明显升高,nephrin、podocin、synaptopodin 蛋白表达明显升高(均 P<0.05);转染 si-TPTEP1 可逆转FGVL对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡和氧化应激反应.结论 FGVL能有效调控细胞增殖与各项氧化反应,其有效调控TPTEP1/miR-770-5p表达是其发挥调控作用的基础,因此有效改善因高糖引起的足细胞受损.

PDZ连接激酶(PBK)是一种丝-苏氨酸激酶,属于丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)家族成员.PBK能调控细胞周期进程,促进细胞增殖.近年发现,其在乳腺癌、结肠癌、皮肤癌和前列腺癌等多种恶性肿瘤组织中均呈高表达,与多种癌症预后不良关联密切.PBK主要通过Wnt、PI3K/AKT/mTOR和MAPK等信号通路,调控肿瘤细胞有丝分裂,参与多种癌症的增殖、侵袭转移和耐药等,并受miR-216b-3p、miR-770-5p和miR-372-5p等多种microRNA调控.提示PBK可能作为又一新的原癌基因,有望成为抑癌药物新的分子靶点.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2B-AS1在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移的影响及分子机制.方法 采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中NUTM2B-AS1表达水平.qRT-PCR法检测口腔上皮角质细胞HOK、口腔鳞状细胞癌细胞系Cal-27、SCC-25、SCC-9、HSC-3中NUTM2B-AS1表达水平.Cal-27细胞分别转染NUTM2B-AS1过表达载体(pmirGLO-NUTM2B-AS1)和空载体(pmirGLO),记为NUTM2B-AS1组和对照组,qRT-PCR验证每组细胞中NUTM2B-AS1表达水平.Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测Cal-27细胞侵袭和迁移.生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验验证NUTM2B-AS1和miR-770-5p的靶向关系.qRT-PCR检测Cal-27细胞miR-770-5 p的表达,Western blot检测Cal-27细胞Sirt7/Smad4信号通路蛋白(Sirt7、E-cadherin、Smad4、MMP-7、Vimentin)的表达.结果 与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中NUTM2B-AS1表达显著降低(P<0.01).与HOK细胞比较,口腔鳞状细胞癌细胞系Cal-27、SCC-25、SCC-9、HSC-3中NUTM2B-AS1表达显著降低(P<0.01),Cal-27细胞中NUTM2B-AS1表达最低(P<0.01).与对照组比较,NUTM2B-AS1组Cal-27细胞中NUTM2B-AS1表达显著升高(P<0.01).与对照组比较,NUTM2B-AS1组Cal-27细胞侵袭数显著降低(P<0.01),Cal-27细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01).miR-770-5p是NUTM2B-AS1的靶向结合基因(P<0.01).与对照组相比,NUTM2B-AS1组Cal-27细胞中miR-770-5p表达显著降低(P<0.01),Sirt7、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01),Smad4、MMP-7、Vimentin蛋白表达下降(P<0.01).结论 NUTM2B-AS1在口腔鳞状细胞癌组织和细胞系中低表达,高表达NUTM2B-AS1可抑制口腔鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移,其作用机制与靶向下调miR-770-5 p表达有关.