目的:建立转座子突变文库，筛选高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae, hvKp)的新毒力基因。 方法:构建转座子突变文库，血清处理，通过转座子测序(transposon sequencing, Tn-seq)比较分析血清处理前后各基因突变株在文库中丰度变化，并对筛选出的基因进行KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)注释和富集分析。结果:以处理后丰度低于初始丰度20%为界，共筛选出405个基因，其中351个基因在HS11286、NJST258_1、NTUH-K2044和RJF293等4株参考菌株中保守存在，占86.7%，10个基因为NTUH-K2044和RJF293两株高毒力株共有而低毒力株HS11286和NJST258_1缺失；荚膜多糖基因簇中基因如糖基转移酶基因 wzy、聚集蛋白基因 wzi、荚膜转运蛋白基因 wza等突变株在血清处理后不能检出，气杆菌素、沙门氏菌素等铁载体基因簇在各文库中的丰度变化不超过1倍；KEGG注释结果显示，注释最多的基因为参与氨基酸代谢、辅助因子和维生素代谢、碳水化合物代谢等。 结论:Tn-seq是功能基因筛选的可靠方法，本研究成功筛选出405个hvKp的候选新毒力基因，为后续深入研究hvKp的新毒力基因功能和调控机制提供实验依据。

目的:探讨肺炎克雷伯菌 wza基因缺失对细菌荚膜形成能力及对噬菌体敏感性的影响。 方法:以野生型肺炎克雷伯菌株W14为背景，利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建Δ wza基因缺失菌株。在溶菌肉汤（LB）培养基固体平板观察菌落形态并在液体LB培养基中测定细菌的生长曲线。通过透射电镜，糖醛酸含量测定的方法检测 wza基因缺失对肺炎克雷伯菌株荚膜形成的影响。并通过观察噬菌斑明确 wza基因缺失是否影响菌株W14对噬菌体phiW14的敏感性。使用 t检验比较菌株W14与Δ wza 缺失菌株荚膜多糖的糖醛酸含量差异情况。 结果:通过PCR技术明确Δ wza基因缺失菌株构建成功。LB固体平板上观察到Δ wza基因缺失菌株的菌落较小，而生长曲线未观察到 wza基因缺失对菌株生长速度的影响。透射电镜结果显示， wza基因缺失后菌株荚膜多糖缺失。糖醛酸含量检测表明Δ wza基因缺失菌株的糖醛酸含量为（45.963±2.795）μg/ml，远低于野生型菌株W14的（138.800±5.201）μg/ml， t=27.233， P<0.001。通过观察噬菌斑发现 wza基因缺失后，菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。 结论:基因 wza的缺失损害了细菌的荚膜形成能力并使得菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。

目的 了解产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)阴沟肠杆菌(ECL)耐药性与毒力基因分布情况.方法 收集2017年1月—2020年11月昆明医科大学第一附属医院分离的ECL,试验组为29株产NDM-1的耐碳青霉烯类ECL(CRECL),对照组为32株不产NDM-1的CRECL和35株碳青霉烯类敏感ECL(CSECL).采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)、全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验,PCR方法检测NDM-1耐药基因、24对毒力基因,采用χ2检验比较毒力基因分布差异.结果 该院分离的CRECL菌株NDM-1基因检出率为47.5％,产NDM-1的CRECL对常用抗菌药物表现为多重耐药.96株ECL菌株中,毒力基因acrA、tolC、wcaA、wcaM、wza的检出率较高,分别为80.2％、90.6％、87.5％、75.0％、92.7％,clpB、icmf、VasD/Lip基因的检出率也均在60％以上,未检出escV、nleB、pet、hlyA等毒力基因.产NDM-1的CRECL组clpB、icmf、VasD/Lip、acrA基因检出率高于不产NDM-1的CRECL,CRECL组clpB、icmf、VasD/Lip基因检出率高于CSECL组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 产NDM-1 CRECL耐药形势严峻而且毒力基因的携带率也增高,临床用药应兼顾细菌的耐药性和毒力基因分布情况.