目的:研究慢病毒介导的基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、TPX2迁移和细胞周期的影响及其机制.方法:构建种4靶向TPX2基因的慢病毒表达载体(LV-TPX2-shRNA-1/2/3/4),同时构建阴性对照质粒,将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒.慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果.选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验.分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况.Western blot检测TPX2-shRNA转染前后Ki-67、cyclin B2、Aurora-A及P53的表达.结果:与对照组比较,构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制HeLa细胞TPX2基因的表达,尤其以LV-TPX2-shRNA-1最为明显(P<0.01),故选择LV-TPX2-shRNA-1进行后续实验.与对照组比较,沉默TPX2基因的表达能降低HeLa细胞增殖及迁移能力(P<0.05),使G2及S期细胞比例明显增加(P<0.05),且上调P53蛋白的表达水平,下调Ki-67、cyclin B2及Aurora-A蛋白的表达水平(P均<0.05).结论:沉默TPX2基因蛋白表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、cyclin B2、Aurora-A蛋白表达水平,上调P53蛋白表达水平有关.

作者：宋淑芳；常海平；杨彩容；赵荣伟；张龙；任杰；郑健

来源：癌变·畸变·突变 2017 年 29卷 5期