目的 采用原核表达系统表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)基因的胞外域,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,制备该蛋白特异性抗血清.方法 构建原核表达质粒gE-pET-32a(+),测序后将其转化至E.coliBL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得VZVgE融合蛋白.采用SDS-PAGE电泳、Western blot法鉴定其特异性,利用Ni2+-NTA柱对gE蛋白进行纯化,复性后免疫新西兰家兔,获得兔抗VZV gE血清;采用间接免疫荧光、Western blot法和ELISA法检测该血清的特异性和效价.结果 成功诱导表达出VZV gE融合蛋白,SDS-PAGE鉴定提示其主要为包涵体表达,浓度约为3.01mg/ml.蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,纯度约为90％.Western blot法显示,经变性、复性后的该融合蛋白有良好的免疫反应性.用该蛋白免疫新西兰家兔后获得兔抗VZV gE血清.ELISA分析显示,该兔抗血清的效价为1∶6400.结论 成功构建了高效表达VZV gE蛋白的原核表达系统,获得较高纯度的gE蛋白,可以作为VZV亚单位疫苗的候选抗原,制备了特异性及效价均较高的兔抗VZV gE多克隆抗体,为VZV感染的临床诊断及治疗提供了重要的实验工具.
作者：伊兴旭；陈敬贤；甘霖；王明丽
来源：安徽医科大学学报 2016 年 51卷 2期
