目的 构建micoRNA-205(miR-205)慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞MB231,建立稳定表达miR-205的MB231细胞株,观察其增殖能力的变化.方法 酶切慢病毒载体GV369,设计并合成miR-205引物,通过PCR扩增目的基因连接到慢病毒载体上.对重组质粒双酶切鉴定,进行慢病毒hsa-miR-205的包装和滴度测定.用构建好的慢病毒感染MB231细胞,定量PCR检测细胞中miR-205表达水平的变化,MTT和划痕实验观察过表达miR-205后MB231细胞增殖和迁移能力的变化.结果 测序显示,目的基因连接慢病毒载体成功.慢病毒稳定感染了MB231,定量PCR结果显示,感染hsa-miR-205的MB231中miR-205表达明显提高,MTT和划痕实验结果显示感染后MB231的细胞增殖和迁移能力受到抑制.结论 成功构建了miR-205慢病毒表达载体,并建立了稳定表达miR-205的细胞株MB231,显示其可能负调控乳腺癌细胞的恶性生物学行为,为后期进一步研究miR-205的功能和机制奠定了基础.
作者：范楚苓；张萍；孙彩虹；钱晨；戚博；赵茹；肖荣琴；刘亚坤；李菲菲
来源：安徽医科大学学报 2017 年 52卷 8期
