分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-A EIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA EIAV)RNA为模板,利用RT-PC R的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列 .然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2 env阅读框架中,构成 CAT拼接报告系统.同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3 上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列T AG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒.用构建的3个重组表达质粒D NA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度.结果表明:EI AV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量最高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒最低.由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAV mRNA外显子-2、 3之间的拼接效率.实验数据表明,EIAV SA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-A EIAV SA2-SD2拼接效率比DLA EIAV相应位点拼接效率高.
作者：刘相冬；张宝山；王滨有；杨威；孙成群；周家喜；王凯波；孔宪刚
来源：病毒学报 2003 年 19卷 4期
