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目的 探讨miR-4458对人结肠癌细胞(H T-29)增殖、凋亡及上皮间质化(EM T)的影响及其作用机制.方法 体外培养HT-29细胞,分为对照组、miR-4458阴性对照(NC)组和miR-4458模拟物(mimics)组,另将人正常结肠上皮细胞(HCoEpiC)设置为正常组.逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测正常组、各组HT-29细胞、结肠癌组织及癌旁组织中miR-4458和信号转导与转录激活因子(STAT3)mRNA表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组HT-29细胞存活率变化;划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移和侵袭变化;Western blot检测各组HT-29细胞上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经性钙粘蛋白(N-cad-herin)和波形蛋白(Vimentin)表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-4458与STAT3的靶向关系.结果 与癌旁组织和正常组细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-4458均低表达,STAT3 mRNA均高表达.Targetscan human数据库预测miR-4458与STAT3 mRNA 3′UTR区有结合位点.与STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 NC组比较,STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 mimics组荧光素酶活性降低(P<0.05).与对照组和miR-4458 NC组相比,miR-4458 mimics组细胞miR-4458表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),存活率、划痕迁移率、侵袭数量、STAT3 mRNA和蛋白表达、N-

作者:颜超;赵强

来源:重庆医学 2021 年 50卷 13期

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作者:
颜超;赵强
来源:
重庆医学 2021 年 50卷 13期
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miR-4458 信号转导与转录激活因子 结肠癌细胞 增殖 凋亡 上皮间质化
目的 探讨miR-4458对人结肠癌细胞(H T-29)增殖、凋亡及上皮间质化(EM T)的影响及其作用机制.方法 体外培养HT-29细胞,分为对照组、miR-4458阴性对照(NC)组和miR-4458模拟物(mimics)组,另将人正常结肠上皮细胞(HCoEpiC)设置为正常组.逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测正常组、各组HT-29细胞、结肠癌组织及癌旁组织中miR-4458和信号转导与转录激活因子(STAT3)mRNA表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组HT-29细胞存活率变化;划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移和侵袭变化;Western blot检测各组HT-29细胞上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经性钙粘蛋白(N-cad-herin)和波形蛋白(Vimentin)表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-4458与STAT3的靶向关系.结果 与癌旁组织和正常组细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-4458均低表达,STAT3 mRNA均高表达.Targetscan human数据库预测miR-4458与STAT3 mRNA 3′UTR区有结合位点.与STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 NC组比较,STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 mimics组荧光素酶活性降低(P<0.05).与对照组和miR-4458 NC组相比,miR-4458 mimics组细胞miR-4458表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),存活率、划痕迁移率、侵袭数量、STAT3 mRNA和蛋白表达、N-

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