目的 构建特异性结合乙型肝炎病毒X基因启动子(Hepatitis Bvirus X promoter,HBV Xp)的人工转录因子真核表达载体,并与拉米夫定(3TC)体外抗乙肝病毒效果进行比较研究.方法 利用Zine finger tools 3.0软件设计特异性结合HBV Xp的锌指蛋白(zinc finger protein,ZFP)并融合抑制性效应结构域kRAB,全基因合成后载入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-nls-ZFP-kRAB-Flag (ATF)、pcDNA3.1(+)-nls-ZFP-Flag(ZFP1)、pcDNA3.1(+)-nls-kRAB-Flag(ZFP2),通过酶切、测序鉴定重组质粒的正确性,Western blot和细胞免疫荧光鉴定重组质粒在HepG2细胞表达情况.将重组质粒转染HepG2.2.15细胞,设空白组(Blank组)、ATF组、ZFP1组、ZFP2组、空质粒组(Emptyvector组)和拉米夫定组(3TC组),分别培养2、6、10 d,用Western blot、FQ-PCR、ELISA分别检测各组HBx蛋白、HBVDNA、上清中HBsAg和HBeAg的表达情况.结果 重组质粒成功构建且能在HepG2细胞中表达;ATF组抑制HepG2.2.15细胞中X蛋白和HBV DNA的表达,与其余各组相比差异有统计学意义(P＜0.05),且6d和10 d抑制作用强于2 d;3TC组亦能抑制HepG2.2.15细胞中X蛋白和HBV DNA的表达(P＜0.05).ATF组能抑制上清中HBsAg,HBeAg的分泌,与其余各组相比差异有统计学意义(P ＜0.05)

作者：刘济铭；陈聪；罗伟；蒋清虎；胡惠文；魏旭福；刘锐；吴忠均

来源：第三军医大学学报 2014 年 36卷 23期