目的 探讨蛋白水解酶DVC1在氮芥诱导人支气管上皮细胞DNA-蛋白交联损伤修复中的作用.方法 利用siRNA干预DVC1表达,50 μmol/L氮芥染毒细胞后,采用Western blot检测DNA损伤修复蛋白的表达;荧光酶标仪测定1～24 h DNA-蛋白交联总量;Slot blot检测DNA与O6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)的共价交联;免疫沉淀检测 MGMT泛素化水平.构建GST-DVC1融合蛋白,GST下拉实验检测DVC1与MGMT、泛素的结合.结果 si-DVC1干预后,DNA-蛋白交联总量升高.氮芥降低交联蛋白MGMT原型的水平,但增强其泛素化水平;DVC1可结合泛素,si-DVC1可进一步增强MGMT的泛素化及DNA-MGMT的交联量,与泛素结合酶抑制剂NSC697923和蛋白酶体抑制剂MG132引起的交联结果类似.si-DVC1引起DNA损伤修复蛋白Rad51表达降低、Ku70表达升高.结论 DNA-蛋白交联的清除依赖于交联蛋白的泛素化;DVC1通过与泛素相互作用,促进氮芥诱导的DNA-蛋白交联的清除,并维持DNA以同源重组方式修复损伤的能力.
作者：程晋；余文珮；叶枫；董训虎；赵远鹏；但国蓉；邹仲敏
来源：陆军军医大学学报 2023 年 45卷 21期
