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目的: 构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体(hscFv)原核表达载体,并对其产物作初步纯化,检测其对人肝癌细胞系SMMC 7721的毒性作用. 方法: 采用基因工程原理,将PE38基因片段亚克隆入hscFv表达载体pGEX-4T-1中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确;转化大肠杆菌JM109后,受IPTG诱导表达GST融合蛋白,产物包涵体经变性、复性及重折叠并经 GST 亲合层析柱层析、凝血酶消化后,得到纯化的hscFv-PE38融合蛋白.采用 MTT 法检测hscFv-PE38对SMMC 7721的杀伤作用. 结果: 实验成功构建了免疫毒素表达载体pGEX-4T-1-hscFv-PE38(以下简称pGEXh-PE38);诱导产物主要以包涵体形式存在,表达量为11
作者：赵强子；刘彦仿；窦科峰；张静；李开宗
来源：第四军医大学学报 2003 年 24卷 9期
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