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目的: 探讨抗前列腺癌多肽融合蛋白在大肠杆菌中的原核表达,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础. 方法:通过BH3, K237, DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列设计多肽药物的氨基酸序列,并依据大肠杆菌的偏爱密码子反翻译成基因序列. 分段合成寡聚脱氧核糖核酸,经磷酸化、退火后,先后克隆至表达载体pGEX-4T-2的BamH I和EcoR I之间. 将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行DNA测序. 用IPTG诱导重组菌株表达并进行SDS-PAGE分析. 结果:pGEX 4T-2-APP216酶切鉴定可见约216 bp电泳条带,与设计长度相符. 测序结果证实pGEX 4T-2-APP216的基因序列与设计完全一致. SDS-PAGE分析表明该基因在原核细胞中获得高效融合表达,所得到蛋白分子质量与预测相符. 融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的30
作者：李斌；郝晓柯；李立文；苏明权；姜南艳
来源：第四军医大学学报 2005 年 26卷 9期
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