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运用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术获取了美洲鲥(Alosa sapidissima)热应激蛋白70(hsp70)的全长cDNA序列,其总长度为2 545 bp,开放阅读框(ORF)为l 914 bp,推测编码637个氨基酸,其氨基酸的二级结构含有HSP70家族的3个特征序列.氨基酸同源性分析显示,美洲鲥hsp70与墨西哥脂鲤(Astyanax mexicanus)等鱼类的相似性达84%以上,与无脊椎动物果蝇(Drosophila auraria)及大肠杆菌(Escherichia coli)的相似性分别为73%和38%.荧光定量PCR检测显示,该基因在美洲鲥鳃、肌肉、头肾中高表达,在脑和心中相对高表达,在肝、脾、肠、肾中微量表达.采用荧光定量PCR方法研究运输应激对美洲鲥未经繁殖的亲鱼hsp70 mRNA水平的影响,在运输实验中鳃、肝hsp70 mRNA水平呈先升高后降低的变化趋势,头肾hsp70 mRNA水平呈现递增趋势.该结果表明克隆到的基因符合诱导型hsp70的特点,而且美洲鲥鳃、肝、头肾组织的hsp70 mRNA对运输应激表现出明显的应答作用.

作者:张勇;徐钢春;杜富宽;顾若波

来源:动物学杂志 2016 年 51卷 2期

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作者:
张勇;徐钢春;杜富宽;顾若波
来源:
动物学杂志 2016 年 51卷 2期
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美洲鲥 热应激蛋白70 基因克隆 基因表达 运输应激 American shad (Alosa sapidissima) Heat stress protein 70 (hsp70) Gene cloning mRNA expression Transport stress
运用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术获取了美洲鲥(Alosa sapidissima)热应激蛋白70(hsp70)的全长cDNA序列,其总长度为2 545 bp,开放阅读框(ORF)为l 914 bp,推测编码637个氨基酸,其氨基酸的二级结构含有HSP70家族的3个特征序列.氨基酸同源性分析显示,美洲鲥hsp70与墨西哥脂鲤(Astyanax mexicanus)等鱼类的相似性达84%以上,与无脊椎动物果蝇(Drosophila auraria)及大肠杆菌(Escherichia coli)的相似性分别为73%和38%.荧光定量PCR检测显示,该基因在美洲鲥鳃、肌肉、头肾中高表达,在脑和心中相对高表达,在肝、脾、肠、肾中微量表达.采用荧光定量PCR方法研究运输应激对美洲鲥未经繁殖的亲鱼hsp70 mRNA水平的影响,在运输实验中鳃、肝hsp70 mRNA水平呈先升高后降低的变化趋势,头肾hsp70 mRNA水平呈现递增趋势.该结果表明克隆到的基因符合诱导型hsp70的特点,而且美洲鲥鳃、肝、头肾组织的hsp70 mRNA对运输应激表现出明显的应答作用.

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