目的:表达并纯化融合蛋白GST-反式转录激活因子蛋白-增强型绿色荧光蛋白(GST-transactivator of transcription- enhanced green fluorescence protein,GST-TAT-EGFP),并研究其是否能跨越血迷路屏障(blood labyrinth barrir,BLB)进入内耳。方法用基因重组技术将编码TAT蛋白11个氨基酸短肽基因和EGFP基因重组,分别构建pGEX-6p-1-TAT-EGFP和pGEX-6p-1-EGFP表达载体,将载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,用GST树脂柱亲和层析纯化融合蛋白。将10只豚鼠随机分为两组,分别肌肉注射GST-EGFP和GST-TAT-EGFP;2~4 h后豚鼠经麻醉、断头取耳蜗等组织。用2
重组融合蛋白质类 迷路 血迷路屏障 反式转录激活因子蛋白 增强型绿色荧光蛋白 Recombinant Fusion Proteins Labyrinth blood labyrinth barrier transactivator of transcription enhanced green fluorescence protein
目的:表达并纯化融合蛋白GST-反式转录激活因子蛋白-增强型绿色荧光蛋白(GST-transactivator of transcription- enhanced green fluorescence protein,GST-TAT-EGFP),并研究其是否能跨越血迷路屏障(blood labyrinth barrir,BLB)进入内耳。方法用基因重组技术将编码TAT蛋白11个氨基酸短肽基因和EGFP基因重组,分别构建pGEX-6p-1-TAT-EGFP和pGEX-6p-1-EGFP表达载体,将载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,用GST树脂柱亲和层析纯化融合蛋白。将10只豚鼠随机分为两组,分别肌肉注射GST-EGFP和GST-TAT-EGFP;2~4 h后豚鼠经麻醉、断头取耳蜗等组织。用2