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目的 以pIRES为载体建立可同时独立表达Ag85A与ESAT6两种抗原的抗结核二价疫苗,探究疫苗剂量对质粒基因体外表达水平的影响.方法 PCR扩增获得Ag85A基因和ESAT6基因,分别插入pIRES质粒的多克隆位点A和B,构建pIRES-Ag85A-ESAT6重组质粒.脂质体2000将重组质粒转入RAW264.7细胞系,Western blot法检测目的蛋白的表达水平.结果 成功构建pIRES-Ag85A-ESAT6重组质粒,在转染后的RAW264.7细胞同时高表达Ag85A与ESAT6,其表达水平与转染的剂量呈正相关.结论 pIRES-Ag85A-ES-AT6二价疫苗的构建将为基于多个抗原同时独立表达的新型多价疫苗设计提供了思路.
作者：张雷；杨小康；胡东；吴静；王文洋；杜久伟；许礼发；张荣波
来源：广东医学 2013 年 34卷 20期
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