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目的 建立一种采用Lightcycler系统进行HBV DNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值.方法 针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBV RT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌(DH5α),经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品.结果 用于制成外标准品的质粒经1∶10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为:Y=-3.344X+37(r2 =0.999 9);通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBV DNA,表明其最低检测限为5×102 IU/mL;拷贝数介于5×102～5×108 IU/mL之间的HBV DNA浓度与Ct值具有良好的线性关系.结论 外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情.
作者：何紫琪；李从荣；童永清
来源：国际检验医学杂志 2014 年 35卷 4期
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