目的:探讨自噬流与脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞(HK-2细胞)炎症反应的关系,检测Toll样受体(TLR4)是否参与其中.方法:实验分为以下5组:阴性对照组、LPS(100 μg/mL)组、LPS(100 μg/mL)+雷帕霉素(RAP)(10 μmol/L)组、LPS(100μg/mL)+氯喹(CQ)(10 μmol/L)组、LPS(100 μg/mL)+TAK242(TLR4拮抗剂)(2μmol/L)组,刺激HK-2细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、TLR4、选择性自噬接头蛋白(P62)和自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA表达和Western blotting检测IL-1β、TLR4、P62和LC3蛋白表达;采用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染HK-2细胞检测自噬流,在共聚焦显微镜下观察自噬体与自噬溶酶体数量变化以判断自噬流表达情况.结果:与阴性对照组比较,LPS可诱导HK-2细胞IL-1β、TLR4和P62 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),LC3 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表达上调(P＜0.05),共聚焦显微镜图示自噬体数明显增多、自噬溶酶体很少,表明自噬流受阻;与LPS组比较,LPS+RAP组IL-1β、TLR4 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05),LC3 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表达上调(P＜0.05),P62蛋白表达下调(P＜0.05),共聚焦显微镜图示自噬溶酶体数量明显增多,表明自噬流得到改善;LPS+CQ组IL-1β、P62、TLR4 mRNA和蛋白表达上调(均P＜0

作者：陈缘；易扬；杨海波；谢恺庆

来源：广西医科大学学报 2020 年 37卷 5期