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目的:合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的 CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性.方法:选取前期研究确定的与胃癌相关的H.pylori CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-CagA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性.结果:设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列(AF289435)基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100
作者：陈雄；徐灿霞；王芬；沈守荣；贾燕
来源：中南大学学报（医学版） 2010 年 35卷 8期
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