目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)应激诱导长链非编码转录本5(long stress-induced noncoding transcript 5,LSINCT5)与肺癌细胞厄洛替尼抵抗的关系及潜在机制.方法:收集并培养人肺癌细胞系A549,H520,H358,H1299,SPCA1和PC9.将表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变型肺癌细胞系PC9分为对照组、抵抗组、干扰I组和II组.对照组采用二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)处理10周后,再用慢病毒转染无意义对照靶向序列表达载体;抵抗组采用梯度浓度的厄洛替尼(浓度分别为0.1,0.2,0.4,0.8和1.6μmol/L)分别处理2周后,再用慢病毒转染无意义对照靶向序列表达载体;干扰I组和II组采用梯度浓度的厄洛替尼(浓度分别为0.1,0.2,0.4,0.8和1.6μmol/L)分别处理2周后,再用慢病毒转染shRNA靶向LSINCT5表达载体1号和2号.细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞厄洛替尼半抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);real-time PCR检测细胞中LSINCT5,磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)mRNA表达;蛋白质印迹法检测细胞PI3K,Akt和磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白表达;RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA immunoprecipitat
作者:陈一川;刘嘉苗;卢婷;唐敬群;李乐之;刘芳
来源:中南大学学报(医学版) 2020 年 45卷 8期