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目的:研究人EGFR胞外段在原核本系的表达、纯化条件以及对小鼠的免疫原性.方法:以既往构建包含人EGFR胞外段基因的表达质粒为基础,采用基因工程方法构建pET原核表达载体.在大肠杆菌中表达目的蛋白,表达蛋白在变性条件下,通过Ni2+柱亲和层析纯化以包涵体形式存在的His-Tag融合蛋白,SDS-PAGE检测其纯度.去余His-Tag的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性.以复性蛋白免疫小鼠获得抗血清,western blotting及流式细胞仪检测特异抗体的存在.结论:通过限制酶切分析及测序鉴定表明获得了人EGFR胞外段基因的pET原核表达载体,SDS-PAGE分析表明在IPTG诱导下可以表达90Kd目的蛋白其纯度大于95

作者:胡兵;田聆;刘健;卢铀;赵霞;魏于全

来源:华西医学 2003 年 18卷 1期

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作者:
胡兵;田聆;刘健;卢铀;赵霞;魏于全
来源:
华西医学 2003 年 18卷 1期
标签:
EGFR 原核表达 免疫原性
目的:研究人EGFR胞外段在原核本系的表达、纯化条件以及对小鼠的免疫原性.方法:以既往构建包含人EGFR胞外段基因的表达质粒为基础,采用基因工程方法构建pET原核表达载体.在大肠杆菌中表达目的蛋白,表达蛋白在变性条件下,通过Ni2+柱亲和层析纯化以包涵体形式存在的His-Tag融合蛋白,SDS-PAGE检测其纯度.去余His-Tag的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性.以复性蛋白免疫小鼠获得抗血清,western blotting及流式细胞仪检测特异抗体的存在.结论:通过限制酶切分析及测序鉴定表明获得了人EGFR胞外段基因的pET原核表达载体,SDS-PAGE分析表明在IPTG诱导下可以表达90Kd目的蛋白其纯度大于95

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