目的 通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得皮质醇特异性核酸适体,建立高品质、超敏、易用和稳定的皮质醇检测试剂盒.方法 人工合成两端固定序列,中间为35 bp随机序列,生成80 bp长度ssDNA文库,捕获序列固定在磁珠上,文库与其退火组装,皮质醇的特异核酸适体通过我们建立的靶标诱导变构解离SELEX(TISSD-SELEX)技术获得.最后一轮的PCR产物经克隆测序,MegAlign 和RNAstructure软件分析其一级和二级结构.实时(real-time)apta-PCR方法分析G12的亲和活性.结果 经过12轮筛选后,获得10个皮质醇的核酸适体.序列分析显示,特异核酸适体以高G含量核酸序列为主,软件预测其中8个序列主要以G四联体二级结构为主,候选核酸适体 G12显示了可以作为生物探针用于皮质醇检测.结论 成功建立TISSD-SELEX技术,获得小分子靶标皮质醇核酸适体.小分子靶标无需将其偶联在固相介质或大分子上,对靶分子结构、性质无特殊要求,因而有望成为小分子靶标核酸适体筛选的通用技术方法.
作者：张岭；王新兴；战锐；弓景波；钱令嘉
来源：军事医学 2011 年 35卷 10期
