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目的：构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7（cyclin－dependent kinase 7， CDK7）的真核表达载体，获得其表达产物，并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因，将其克隆到pXJ－40载体中；继而重组质粒转染人胚肾293 T细胞，以SDS－PAGE和Western印迹鉴定表达情况；免疫共沉淀检测Myc－CDK7与FLAG－p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示，Myc－CDK7真核表达质粒克隆构建成功；SDS－PAGE和Western印迹结果表明，Myc－CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达；免疫共沉淀显示，重组Myc－CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用，证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc－CDK7的真核表达载体，为进一步探讨Myc－CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。
作者：冀全博；徐小洁；张强；梁迎春；王涛；李玲；黄蓉；周丽英；史平安；王岩；叶棋浓
来源：军事医学 2014 年 12期
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