目的 构建一种可以同时靶向抑制人类表皮生长因子受体2(HER2)和表皮生长因子受体(EG-FR)分子的双特异性单链抗体,从而降低单一通路抑制而造成的耐药性,增强抗肿瘤效果.方法 采用Overlap PCR法通过柔性肽(G4S)将曲妥珠单抗的可变区与西妥昔单抗连接,构建工程载体,并通过大肠埃希菌系统进行表达纯化,获得同时靶向HER2和EGFR的双特异性单链抗体;流式细胞术检测双特异性单链抗体对EGFR和HER2过表达的乳腺癌细胞BT474的结合能力;噻唑蓝(MTT)法检测单链抗体对BT474乳腺癌细胞的增殖抑制;建立BT474荷瘤小鼠动物模型,检测双特异性单链抗体的体内抗肿瘤活性;使用免疫组织化学检测单链抗体是否可以抑制表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化,并对肿瘤细胞增殖指标Ki-67进行检测.结果 通过基因工程手段和毕赤酵母表达及镍柱纯化,成功获得双特异性单链抗体,经蛋白印迹法鉴定验证了双特异性单链抗体表达及装配正确.流式细胞术检测双特异性单链抗体与乳腺癌细胞B T 474的结合率为53.3％,与曲妥珠单抗(69.0％)、西妥昔单抗结合率(60.3％)相当.MTT法中,与磷酸盐缓冲液(PBS)组相比,曲妥珠单抗组、西妥昔单抗组与双特异性单链抗体组对乳腺癌细胞BT 474均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.在蛋白水平为400 nmol/L时,双特异性单链
作者：郭艳；张长庆
来源：检验医学与临床 2018 年 15卷 19期
