目的 探究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcells,AEC-Ⅱ)及紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的影响.方法 体外培养大鼠AEC-Ⅱ细胞,将细胞分为正常对照组,TNF-α24 h、48 h、72 h组.对照组用含胎牛血清的DME F12培养液培养细胞,TNF-α各组用TNF-α(10 ng/mL)分别刺激细胞24、48、72 h.共培养结束后采用透射电镜鉴定并观察细胞超微结构的变化.MTT法测定细胞增殖抑制情况.流式细胞仪测定细胞早期凋亡率.免疫荧光法观察各组细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达分布,实时荧光定量PCR法测定各组细胞ZO-1、Claudin-4 mRNA水平的变化,Western blot测定紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的变化.多组样本间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验.方差不齐时则用秩转换的非参数检验.以P<0.05为差异有统计学意义.结果 透射电镜下可见对照组大鼠AEC-Ⅱ细胞内含有大小不等的特征性板层小体,TNF-α各组板层小体逐渐排空,视野下可见凋亡细胞.TNF-α各组细胞的早期凋亡率及增殖抑制率均较对照组降低(均P<0.05).共聚焦显微镜下观察到ZO-1沿细胞膜呈线状分布,Claudin-4沿细胞膜呈散点状分布,TNF-α各组ZO-1的荧光强度减弱,连续性被破坏,线性结构断裂,甚至消失.C
作者：石国翠；马申懋；马希刚
来源：中华急诊医学杂志 2019 年 28卷 9期
