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[目的]研究家蚕Bombyx mori磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine 5’-phosphate oxidase,PNPO)个别保守氨基酸残基对PNPO酶活性的影响.[方法]用重叠延伸法把氨基酸残基Lys111 (AAA)突变为Glu (GAA),Ser160(AGC)定点突变为Ala(GCC)；构建重组表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达,经亲和纯化后进行酶活鉴定.[结果]重组蛋白的分子量约为45.0 kDa.体外酶活分析发现,家蚕氨基酸残基Lys111突变体K11lE活性降低了约78.0％,Ser160突变体S160A的活性降低了67.4％.[结论]结果提示氨基酸残基Lys111和Ser160对维持家蚕PNPO的酶活性有重要作用.本研究明确了家蚕磷酸吡哆醇氧化酶个别保守氨基酸残基的酶学功能.
作者：童宁；张剑韵；黄龙全
来源：昆虫学报 2011 年 54卷 11期
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