目的 应用腺病毒技术下调Akt/mTOR表达水平,检测Akt/mTOR基因沉默对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 收集人肾癌及癌旁样品,Real time PCR检测两组样品中Akt和mTOR的mRNA水平.利用病毒包装细胞293A获得靶向Akt/mTOR基因的重组腺病毒,感染人肾癌786-O细胞株.实验分2组:加入靶向Akt/mTOR基因的腺病毒感染的肾癌细胞组(rAd5-Am组),未处理的腺病毒感染的肾癌细胞组(NC组).应用Real time PCR及Western blot检测干扰前后Akt和mTOR mRNA及蛋白表达水平的变化.用细胞增殖及凋亡试剂盒检测Akt和mTOR沉默后,肾癌786-O细胞增殖、凋亡及PCNA表达水平的改变.结果 与癌旁组织相比,Akt和mTOR的mRNA水平在肾癌组织中分别上调了2.613和3.254倍.成功获得knock down Akt/mTOR的rAd5-Am腺病毒及对照腺病毒,感染肾癌786-O细胞.Real time PCR显示rAd5-Am组与NC组相比Akt/mTOR的mRNA水平分别下调65.3％和77.1％,Western blot结果显示rAd5-Am组与NC组相比Akt/mTOR的蛋白表达水平分别下调78.4％和89.2％.rAd5-Am能显著降低786-O细胞中Akt/mTOR基因的表达.细胞增殖与凋亡实验表明,Akt/mTOR基因沉默后能显著抑制肾癌细胞786-O的增殖,并促进其凋亡(rAd5-Am组细胞凋亡率是NC组的2.57倍).进一步的实验结果表明,Akt/mTOR下调后能降

作者：陆文俊；夏世金；张晓丽；叶志斌；吴毓敏

来源：老年医学与保健 2013 年 19卷 3期